1、喜樹(shù)(Camptotheca acuminata)是珙桐科(Nyssaceae)的一種落葉闊葉樹(shù),為優(yōu)良的園林綠化樹(shù)種,喜樹(shù)還可以產(chǎn)生具有抗腫瘤作用的喜樹(shù)堿.本文以喜樹(shù)(Camptohteca acuminata.)為材料,建立了帶芽莖段的快速繁殖體系、子葉節(jié)的快速繁殖體系以及愈傷組織培養(yǎng)體系,為喜樹(shù)堿高產(chǎn)株系的優(yōu)株快繁,喜樹(shù)愈傷組織細(xì)胞懸浮培養(yǎng),及喜樹(shù)遺傳轉(zhuǎn)化研究奠定基礎(chǔ).帶芽莖段快速繁殖體系:以成年喜樹(shù)帶芽莖段為外植體,采用75％酒

2、精浸泡30sec,0.1％HgCl<,2>+數(shù)滴Tween20滅菌10min表面消毒方法能較好的控制微生物的污染.以MS+6-BA1.0mg/L+NAA 0.5mg/L為腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基,腋芽萌發(fā)率高,達(dá)75％以上,20d腋芽伸長(zhǎng)到1.5cm左右.MS+6-BA0.5mg/L上誘導(dǎo)叢生芽,20d后得到8個(gè)芽/1個(gè)腋芽.子葉節(jié)快速繁殖體系:以7d齡的無(wú)菌苗子葉節(jié)胚芽區(qū)域?yàn)橥庵搀w,以NN<,69>附加6-BA(0.2mg/l),IBA(0.0

3、5mg/l),AS(afenine sulfate,10mg/l)的培養(yǎng)基對(duì)叢生芽的誘導(dǎo)與增值效果最佳.愈傷組織培養(yǎng)體系:子葉、幼葉、胚軸均可誘導(dǎo)愈傷組織,但誘導(dǎo)愈傷組織的誘導(dǎo)率,出愈時(shí)間以下胚軸優(yōu)于子葉,子葉優(yōu)于幼葉.在光照培養(yǎng)條件下,培養(yǎng)在MS+2mg/LNAA+0.25mg/L6-BA+0.2mg/L2,4-D培養(yǎng)基上的愈傷組織生長(zhǎng)較快,20d培養(yǎng)的愈傷組織生長(zhǎng)速率為1121％,在黑暗培養(yǎng)條件下,愈傷組織生長(zhǎng)最佳培養(yǎng)基為MS+NA

4、A4mg/L+6-BA 0.5mg/L+2,4-D 0.6mg/L.愈傷組織生長(zhǎng)適宜的蔗糖濃度為20-30g/L,最適生長(zhǎng)PH為5.8-6.2.下胚軸來(lái)源的愈傷組織在分化培養(yǎng)基NN<,69>+6-BA0.2 mg/L+IBA0.1 mg/L+AS10mg/L上分化出芽,分化率為90％以上.叢生芽在MS附加0.5mg/L的6-BA的培養(yǎng)基上增殖,每20d在原培養(yǎng)基以8個(gè)芽/單芽的速度增殖.單芽的壯芽培養(yǎng)基為:B5+0.56-B A mg/