1、1.用IS-PCR和rep-PCR法分析了17份分離自云南滇西高原粳稻區(qū)的水稻白葉枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae)和7個(gè)其它地區(qū)的水稻白葉枯病菌的群體遺傳多樣性.2個(gè)適合中國(guó)水稻白葉枯病菌的引物J3和ERIC對(duì)這24個(gè)菌系基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng),J3引物有14條條帶,ERIC引物有13條條帶,2個(gè)引物呈現(xiàn)18種譜型.2.菲律賓白葉枯病菌株P(guān)XO339是9a生理小種的代表菌株,它對(duì)Xa7,Xa4,

2、Xa10和Xa14等抗病基因表現(xiàn)毒性,而對(duì)隱性抗病基因xa5表現(xiàn)無(wú)毒.從PXO339中克隆到一個(gè)新的無(wú)毒基因,全長(zhǎng)2118bp,編碼705個(gè)氨基酸,分子量和等電點(diǎn)分別為74.7kDa和6.585.NCBI網(wǎng)站BLAST表明,該基因?qū)儆贏vrBs3基因家族,命名為arp3(AvrBs3 related protein).與所有AvrBs3基因家族成員的基因序列Alignment分析發(fā)現(xiàn),Arp3的N-端缺少了兩個(gè)長(zhǎng)度分別是144bp和45

3、bp的片斷.進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),在水稻白葉枯病菌中,Arp3N-端的特征很普遍,都缺少這兩個(gè)片斷.全長(zhǎng)的arp3基因中間序列是一個(gè)特異的5.5次102bp的重復(fù)區(qū)(Repeats),是目前已經(jīng)克隆的AvrBs3基因家族所有成員中重復(fù)次數(shù)最少的一個(gè).Southern分析發(fā)現(xiàn)該基因在PXO339基因組中單拷貝存在,而且只位于PXO339的質(zhì)粒DNA上,推測(cè)它可能是一個(gè)候選的avrxa5基因.3.從白葉枯病菌中克隆到兩個(gè)Quorum Sensin

4、g(QS)相關(guān)的同源基因.xooR是一個(gè)轉(zhuǎn)錄因子,全長(zhǎng)765bp;相鄰的amino acid transporter(aat)基因是一個(gè)跨膜蛋白,全長(zhǎng)1377bp.Southern分析表明,這兩個(gè)基因單拷貝存在基因組中.利用原核表達(dá)載體pET-24a-d(+)構(gòu)建融合表達(dá)載體,EGFP基因標(biāo)記,跨膜蛋白aat基因在膜上表達(dá);Western分析顯示XooR-GFP融合蛋白大小為54kDa,表達(dá)在細(xì)胞液中某一特定區(qū)域,PCR方法刪除XooR