1、山東農業(yè)大學碩士學位論文雞致病性大腸桿菌菌毛免疫原性及其FimA和FimH基因的研究姓名：隋兆峰申請學位級別：碩士專業(yè)：預防獸醫(yī)學指導教師：趙宏坤范偉興2003.6.1山東農業(yè)大學碩士學位論文摘要從山東省分離到了107株雞太腸桿菌，攻毒試驗后，對其中16株高致病性大腸桿菌進行了血清型鑒定，主要血清型為078。通過血凝試驗及PCR鑒定得知，這16株大腸桿菌主要表達I型菌毛。菌毛的表達受許多因素的影響，本研究從培養(yǎng)時間，培養(yǎng)方式等條件對菌毛

2、表達的影響進行了探索，實驗結果表明：培養(yǎng)72小時，菌毛可良好表達，振搖培養(yǎng)優(yōu)于靜止培養(yǎng)。菌毛提取方法的研究結果表明，保溫法優(yōu)于攪拌法。提取的菌毛蛋白經SDS—PAGE測得其分子量約為17KDa。f選擇3株表達I型菌毛的優(yōu)勢致病血清型雞大腸桿菌作為試驗株，分NYg“yx(024)、QD5(078)、QD2(02)。經增菌培養(yǎng)后提取菌毛制備成單價和多價2種菌毛油乳苗。分別于1日齡免疫一次和1日齡、14日齡免疫二次對雞只進行免疫試驗，并于4周

3、齡攻毒。結果表明：用血清型O，s(QD5)制備的單價菌毛亞單位油乳苗能夠有效保護其同源菌株的攻擊，且接種免疫兩次的效果明顯優(yōu)于一次免疫。交叉保護試驗表明QD5(078)、QD9(02)和JX(024)之間存在著一定的交叉保護作用。多價菌毛亞單位油乳苗免疫試驗結果表明，由QD5(078)、QD9(02)和Ⅸ(024)菌株提取的菌毛制成的多價菌毛亞單位油乳苗能有效保護雞分別抵抗3種同源菌株經氣囊的攻擊。參照Genbank收錄的禽源大腸桿菌I

4、型菌毛FimA基因序列，應用DNAStar軟件分析，在其保守區(qū)設計了一對特異性引物。以煮沸法提取的16株雞大腸桿菌基因組DNA為模板，進行PCR擴增。16個分離株中有14株(除QD6與FN外)擴增出特異的目的片段。選擇其中2株(QD5與JX)的PCR產物進行了克隆和序列測定，并用DNAStar等軟件分析測序結果，證明所擴增的產物為FimA片段，其核苷酸序列同源性較高，為998％。分析抗原性圖譜發(fā)現(xiàn)，二者的抗原峰圖基本相同，抗原變異主要集