比較用質(zhì)粒營(yíng)救法和TAIL-PCR法獲得水稻FSTs的效率.pdf_第1頁(yè)
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1、獲得突變體中T-DNA的旁鄰序列是通過(guò)反向遺傳學(xué)進(jìn)行功能基因研究的重要手段.實(shí)驗(yàn)比較了用質(zhì)粒營(yíng)救法和TAIL-PCR法獲得T-DNA在水稻(Oryza sativa)基因組中旁鄰序列的效率.實(shí)驗(yàn)構(gòu)建了植株雙元表達(dá)載體pBsBar,用根癌農(nóng)桿菌(Agrobacterium tumefaciens)EHA105轉(zhuǎn)入兩個(gè)粳稻(O.sative ssp japonica)品種Nipponbare和中花11的幼胚愈傷組織,共獲得了1000株左右的

2、轉(zhuǎn)化苗.根據(jù)該實(shí)驗(yàn)結(jié)果,質(zhì)粒營(yíng)救法從轉(zhuǎn)基因植株獲得的旁鄰序列是水稻基因組DNA的效率是72﹪左右,比TAIL-PCR法要高18﹪左右.根據(jù)獲得的T-DNA在水稻基因組中的旁鄰序列,T-DNA插入水稻基因組的基因區(qū)和非基因區(qū)的幾率相差不大,但是對(duì)于基因的5'-和3'-調(diào)控區(qū)有著一定程度的偏好,而且T-DNA插入基因區(qū)時(shí)較多的是插在了內(nèi)含子區(qū).T-DNA插在水稻染色體兩臂的幾率要遠(yuǎn)大于插在著絲粒,同時(shí)T-DNA也很少插在重復(fù)DNA區(qū)域內(nèi),表

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