1、山東農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文草莓離體再生及抗病基因遺傳轉化的研究姓名：王海波申請學位級別：碩士專業(yè)：蔬菜學指導教師：孟祥棟2002.6.1王海波：草莓離體再生及抗病基因遺傳轉化的研究摘要本研究以草莓品種豐香、矮豐、萊斯特和北斗為試材，研究了品種、激素配比、培養(yǎng)基、外植體、苗齡和培養(yǎng)條件對草莓不定芽再生的影響，優(yōu)化了革莓再生條件，獲得了草莓高效再生體系。通過葉盤與農(nóng)桿菌共培養(yǎng)的方法建立了矮豐草莓的遺傳轉化體系，將抗真菌Y一硫堇蛋白(Y—thi

2、onin)RsAFPl基因導入矮圭堇莓葉片外植體，獲得了Kanamycin抗性植株。GUS化學組織染色和PCR檢測分析表明外源基因已整合到草莓基因組中。，f再生實驗結果表明，矮豐草莓的再生能力明顯高于其它3個品種。培養(yǎng)基組成和激素配比直接影響草莓再生，MS(無機成分)B5(有機成分)培養(yǎng)基與MS、N。和WPM培養(yǎng)基相比可得到較高的不定芽再生率，在MS無機成分B5有機成分TDZ20mg／LIBAO1mg／L的培養(yǎng)基上再生率達975％。蔗糖

3、、瓊脂濃度和pH值也對草莓再生有顯著影響，以蔗糖3％(W／V)，瓊脂075％(w～)，pH5，8為最佳培養(yǎng)基條件。以BA代替TDZ后，不定芽再生率沒有顯著變化，但再生不定芽長勢減弱。暗處理和苗齡都影響草莓的再生，以35～40天苗齡，暗處理7天為晟佳培養(yǎng)條件。用矮豐草莓葉片和葉柄進行不定芽再生實驗，發(fā)現(xiàn)葉片再生頻率明顯高于葉柄，葉片接觸培養(yǎng)基的方式對再生沒有顯著影響。再生芽可在MSBAO2mg／LIBA01mg／L的培養(yǎng)基上生根。在建立矮

4、豐葉片不定芽再生體系的基礎上，利用農(nóng)桿菌介導的遺傳轉化法進行矮豐遺傳轉化研究。結果表明，預培養(yǎng)降低GUS的瞬時表達量：菌液濃度在OD550。。=O3～05之間GUS瞬時表達量最大，侵染時間以30～60分鐘為宜，共培養(yǎng)3天，IBA和AS的存在可以提高GUS瞬時表達量。共培養(yǎng)中Kan濃度過高不利于不定芽的分化，20mg／L的Kan可有效地抑制非轉化芽的再生。Carb對不定芽再生無明顯影響，試驗中以300mg／L的Carb作為農(nóng)桿菌生長的抑制