水稻草狀矮化病毒對(duì)褐飛虱翅型分化的影響.pdf_第1頁(yè)
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1、水稻草狀矮化病毒(Rice grassy stunt virus, RGSV),是纖細(xì)病毒屬的成員之一,可以引起水稻草狀矮化?。≧ice grassy stunt disease),簡(jiǎn)稱水稻草矮病,是熱帶和亞熱帶地區(qū)水稻上的重要病害之一,嚴(yán)重時(shí)甚至可造成水稻的絕產(chǎn)。該病毒由昆蟲(chóng)介體褐飛虱(Nilaparvata lugens)以持久、增殖性方式傳播。褐飛虱是一種遷飛性害蟲(chóng),成蟲(chóng)具有明顯的翅二型現(xiàn)象。有研究表明,病毒的侵染會(huì)對(duì)褐飛虱的翅型

2、分化產(chǎn)生影響。本課題通過(guò)生物學(xué)統(tǒng)計(jì)實(shí)驗(yàn)、熒光定量 PCR實(shí)驗(yàn)、酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)、亞細(xì)胞共定位實(shí)驗(yàn)和原核表達(dá)實(shí)驗(yàn)對(duì)該問(wèn)題進(jìn)行了研究,研究結(jié)果如下:
  1、生物學(xué)統(tǒng)計(jì)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明,褐飛虱攜帶RGSV種群和無(wú)毒種群成蟲(chóng)的翅型分化存在顯著差異,其中無(wú)毒蟲(chóng)的短翅型比例為23.17±0.56%,長(zhǎng)翅型比例為60.43±0.22%。而飼過(guò)毒的褐飛虱短翅型的比例為36.26±0.42%,長(zhǎng)翅型比例為52.32±1.16%。
  2、通過(guò)實(shí)

3、時(shí)熒光定量 qRT-PCR實(shí)驗(yàn)對(duì)褐飛虱翅型分化相關(guān)基因 flightin、Tnc、Titin、LN-a2在褐飛虱體內(nèi)的表達(dá)量進(jìn)行了測(cè)定,結(jié)果表明,RGSV侵染后,各基因均表現(xiàn)為下調(diào)。
  3、成功的構(gòu)建了酵母表達(dá)載體pGADT7-flightin。通過(guò)酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)得出褐飛虱flightin蛋白能夠與RGSV的P1,P3,P5蛋白產(chǎn)生互作。
  4、成功構(gòu)建了瞬時(shí)表達(dá)載體pEarly gate101-flightin和pEa

4、rly gate102-flightin。通過(guò)亞細(xì)胞共定位實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證了flightin與RGSV的P1,P3,P5蛋白之間的互作。
  5、成功構(gòu)建了原核表達(dá)載體pDEST17-flightin,制備了褐飛虱flightin基因的多克隆抗體,Western blot實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)結(jié)果表明,所制備的抗血清能夠特異性地檢測(cè)褐飛虱體內(nèi)的flightin蛋白,間接ELISA檢測(cè)結(jié)果表明所制備的抗體效價(jià)為1:6400。
  綜上所述,

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