1、MicroRNAs(miRNAs)是一類大小為21-24nt的非編碼RNA，它廣泛存在于動(dòng)植物體內(nèi)，通過控制靶基因的轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后水平來調(diào)控基因的表達(dá)，在動(dòng)植物生長發(fā)育過程中起著非常重要的作用。大量研究表明，部分miRNAs在植物的成花及花發(fā)育過程中扮演著重要的角色，在年齡途徑主要依賴miR156和miR172對(duì)成花調(diào)控基因進(jìn)行調(diào)節(jié)。本實(shí)驗(yàn)室前期通過轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，共在枳中獲得4個(gè)PtmiR172家族基因，分別是PtmiR172-03、Ptm

2、iR172-12、PtmiR172-36和PtmiR172-64。本研究分離了柑橘不同種屬4個(gè)miR172家族基因，并進(jìn)行了序列比對(duì)分析。同時(shí)，分別構(gòu)建了4個(gè)Ptpre-miR172的超量表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化模式植物煙草和枳中進(jìn)行超量表達(dá)，初步分析了PtmiR172家族中不同成員的功能。主要研究結(jié)果如下:
　　1.分別在普通枳、早實(shí)枳、金柑、溫州蜜柑和甜橙中分離了4個(gè)miR172家族基因。序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)，同一個(gè)基因在不同種屬中的同源性很高

3、，不同基因在同一品種中雖然側(cè)翼序列差異性大，但核心序列差異性很小;在不同物種中的序列比對(duì)，發(fā)現(xiàn)miR172核心序列的同源性很高，這說明miR172家族基因的保守性很高。
　　2.采用Real-time PCR檢測(cè)了PtmiR172基因在枳和早實(shí)枳成花不同時(shí)期的表達(dá)量。在普通枳和早實(shí)枳成花轉(zhuǎn)變階段中，各時(shí)期PtmiR172的表達(dá)量差別較大，但表達(dá)模式一致:在普通枳和早實(shí)枳成花初期PtmiR172的表達(dá)量最高，隨著花芽的形成表達(dá)量逐漸

4、降低，開花時(shí)表達(dá)量逐漸上升;同時(shí)對(duì)其靶基因PtAP2的表達(dá)量進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)PtAP2的表達(dá)模式與PtmiR172正好相反，表明在枳中PtmiR172可能通過靶向調(diào)節(jié)PtAP2的表達(dá)，從而調(diào)控成花。
　　3.構(gòu)建35S∷Ptpre-miR172-03、12、36、64超表達(dá)載體，并進(jìn)行煙草和普通枳的遺傳轉(zhuǎn)化。獲得了PtmiR172-12、36、64超表達(dá)的煙草陽性植株，并在DNA水平和RNA水平進(jìn)行陽性檢測(cè)，分別獲得18，15和11