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![禾本科牧草分蘗形態(tài)及產(chǎn)量關(guān)聯(lián)基因克隆與表達特性研究.pdf_第1頁](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/1/9/3a93dae8-03da-43ae-8bc0-306425bd6e86/3a93dae8-03da-43ae-8bc0-306425bd6e861.gif)
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文檔簡介
1、分蘗是指禾本科植物莖稈基部節(jié)上產(chǎn)生的獨立于主干的分支發(fā)生過程,決定著農(nóng)作物穗數(shù)。通過分蘗進行克隆生長的牧草、雜草等克隆植物常以其耐鹽堿、耐貧瘠、抗寒冷等諸多優(yōu)良性狀而成為群落的建群種和優(yōu)勢種。以水稻功能基因作參照來克隆賴草屬和羊茅屬相應功能基因,并對新得到的相應功能基因進行綜合分析和驗證,通過實時熒光定量PCR檢測,獲取該關(guān)鍵功能基因的表達時段、組織特異性數(shù)據(jù),結(jié)合功能基因的綜合分析,初步揭示相應關(guān)鍵功能基因?qū)瘫究颇敛菪螒B(tài)分化的影響及
2、產(chǎn)量構(gòu)成的貢獻,并進而對其應用前景作出初步評價。
通過電子克隆方法獲得禾本科賴草屬和羊茅屬共6個功能基因,提交Genbank獲得登錄號。其中,羊茅屬中編碼一種MADS-box轉(zhuǎn)錄因子的OsMdp1基因和調(diào)控葉綠素合成的OsHAP3基因的登錄號分別是JQ317021、JX312558;賴草屬中編碼一種環(huán)形E3泛素連接酶的DW2基因、編碼葉綠素a-b結(jié)合蛋白的cca-bbp基因、編碼調(diào)控側(cè)芽生長的負調(diào)控因子的TB1基因和編碼鋅指核
3、轉(zhuǎn)錄因子的PROG1基因,登錄號分別為JQ083606、JX397992、KC479014和KC493770。這些基因通過電子克隆方法的獲得對后續(xù)進行實際克隆奠定了基礎?;谏鲜鲅芯炕A,對賴草屬中有關(guān)抗鹽堿特性的ACC基因進行克隆。通過同源基因克隆技術(shù)獲得其保守區(qū)序列,經(jīng)測序后得到的序列為341bp,與羊草LcA04F05基因進行同源性分析,一致性為65.29%。通過生物信息學手段,預測該基因的開放閱讀框,編碼99個氨基酸,分子量11
4、275道爾頓,編碼區(qū)位于基因的41~341bp,為親水性蛋白。將該編碼框翻譯所得的氨基酸序列與小麥ACC基因編碼的氨基酸序列之間進行蛋白質(zhì)同源性分析得到47.83%的一致性,其保守區(qū)的一致性高達99%。二級結(jié)構(gòu)是由α螺旋(占37.00%),β折疊(占18.00%),無規(guī)卷曲(占45.00%)組成,無其他二級結(jié)構(gòu)。預測其屬于α-酮戊二酸/鐵依賴性加雙氧酶(2-oxoglutarate/Fe(Ⅱ)-dependent dioxygenase
5、)蛋白質(zhì)家族。ACC基因的克隆為賴草抗鹽堿相關(guān)調(diào)控的研究提供依據(jù)。
探究日光照時長對賴草LRC1基因表達的影響,葉片及葉鞘部位的檢測結(jié)果推測LRC1基因表達量高低受到日光照時長的影響;莖部分的檢測結(jié)果顯示在正常培養(yǎng)和逐級縮短光照時長處理條件下,LCR1基因表達量呈現(xiàn)逐漸下降趨勢,但是前者遞減的程度較后者緩慢,隨著時間的推移和分化進程的推進,在取樣階段后期,基因表達量減少的趨勢發(fā)生波動,推測該基因在該組織部分可能行使新的功能;莖
6、根結(jié)合部分的檢測結(jié)果推測日光照時長縮短對LRC1基因表達有抑制作用,而未施加處理條件時LRC1基因表達量在有波動的前提下,基本呈現(xiàn)表達量平穩(wěn)的趨勢,推測在正常培養(yǎng)條件下該基因表達量基本維持恒定。日光照時長這一外界環(huán)境因子對賴草LRC1表達影響的研究為進一步探究其他環(huán)境因子對該基因表達的影響提供了示范,同時為探究其他禾本科功能基因的表達調(diào)控模式奠定了基礎。
本課題研究的開展,為從分子和基因調(diào)控水平對典型草原代表屬尤其是通過分蘗進
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