1、P-gp由mdr1基因編碼，首次在耐藥的中國倉鼠卵巢細胞中發(fā)現(xiàn)，是ABC轉(zhuǎn)運家族中第一個被發(fā)現(xiàn)的與腫瘤細胞多藥耐藥相關(guān)的蛋白。P-gp能識別和轉(zhuǎn)運許許多多化學機構(gòu)與相對分子質(zhì)量差別很大的物質(zhì)，包括抗菌藥物、抗病毒藥、抗癌藥物、免疫抑制劑、抗心律失常藥等等。P-gp除了在癌細胞中高表達外，在正常的器官和組織中也有分布，主要定位于具有分泌和排泄功能的細胞上皮。腸道是主要的吸收器官，肝臟、腎臟是主要的代謝、排泄器官，定位在腸道、肝臟、腎臟的P

2、-gp是影響其底物藥代動力學的主要因素。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，P-gp的表達存在物種差異，而目前關(guān)于P-gp的研究主要集中在人類和嚙齒類動物，有關(guān)豬組織中P-gp定位以及相關(guān)功能的數(shù)據(jù)卻非常有限，故本試驗首先采用免疫組織化學的方法研究了多藥耐藥蛋白P-gp在健康仔豬肝臟、腎臟和腸組織中的定位情況，并采用real-time RTPCR方法檢測了不同組織中mdr1的mRNA表達水平，同時進一步探討了P-gp對氟喹諾酮類抗菌藥恩諾沙星的藥動學影響

3、，為進一步研究P-gp的功能和調(diào)控奠定基礎(chǔ)。
　　 首先，我們采用免疫組織化學方法對豬腸道、肝臟和腎臟中的P-gp進行了定位，采集5頭60日齡健康仔豬的肝臟、腎臟、十二指腸、空腸、回腸、盲腸、結(jié)腸和直腸用4％多聚甲醛固定，石蠟包埋后，連續(xù)5μm切片，37℃過夜烤片后，利用抗MDR1的抗體對以上組織中的P-gp進行組織定位。結(jié)果表明: P-gp主要定位于肝臟肝細胞間的膽小管膜上。在腎臟主要分布于近端小管和遠端小管的細胞膜上。P-g

4、p在小腸的不同部位也均有分布，主要位于于腸絨毛上皮細胞頂端及小腸腺腔面上皮細胞頂端。P-gp在大腸中主要分布在黏膜上皮細胞頂端和大腸腺上皮細胞頂端。
　　 然后選取gapdh為看家基因，采用real-time RT PCR方法檢測了mdr1基因在健康豬十二指腸、空腸、回腸、盲腸、結(jié)腸、直腸、肝臟和腎臟中的mRNA表達水平，為進一步研究P-gp的功能提供參考。我們選取5頭60日齡健康三元仔豬作為研究對象，宰殺后迅速取其組織置于液氮

5、中，后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱保存，提取肝臟、腎臟和腸組織的總RNA，反轉(zhuǎn)后對mdr1基因進行了相對定量。結(jié)果顯示mdr1在豬肝臟、腎臟和各腸組織中均有表達，表達量由高到低依次為:回腸、結(jié)腸、肝臟、空腸、十二指腸、直腸、盲腸和腎臟。其中回腸表達量最高，且與十二指腸、直腸相比差異顯著（P=0.017，P=0.014），與盲腸和腎臟相比差異極顯著（P=0.005，P=0.001）。mdr1在空腸、結(jié)腸和肝臟中的相對表達量與腎臟相比差異顯著（P=0.

6、046，P=0.018，P=0.030）。
　　 進一步建立了高效液相色譜(HPLC)的方法用于實時監(jiān)測豬口服恩諾沙星后在血漿中的藥物濃度變化，檢測P-gp抑制劑維拉帕米對豬口服恩諾沙星的藥動學影響。試驗選用8頭健康60日齡三元仔豬，體重19～21 kg，隨機平均分為單劑量口服恩諾沙星組和維拉帕米處理組。恩諾沙星組動物單劑量(10mg/kg·bw)灌服恩諾沙星，維拉帕米處理組動物灌服維拉帕米(10 mg/kg·bw)30 min

7、后，再灌服恩諾沙星(10 mg/kg·bw)，分別于0、0.083、0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、3、4、5、6、8、12和24 h從前腔靜脈無菌采血，4℃，3500 rpm離心10 min分離血漿，采用HPLC法測定血漿中恩諾沙星的藥物濃度，用3p97藥動學軟件處理血藥濃度-時間數(shù)據(jù)，計算藥動學參數(shù)。結(jié)果顯示:恩諾沙星在豬體內(nèi)的藥動學模型符合一級吸收一室模型，其吸收速率常數(shù)ka=0.82±0.11，達峰時間為Tpeak=

8、2.01±0.09，血漿中峰濃度為Cmax=3.39±0.12，消除半衰期為T1/2ke=2.50±0.23，藥時曲線下面積AUC(0-2h)=13.57±0.96;用維拉帕米處理后，能顯著促進恩諾沙星的吸收速度，表現(xiàn)為吸收速率常數(shù)（2.08±0.11）、達峰時間（1.17±0.05）極顯著低于恩諾沙星對照組（P＜0.01）和AUC(0-2h)（16.50±0.44）顯著高于恩諾沙星對照組(P＜0.05)。但其他藥動學參數(shù)如Cmax（3