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文檔簡介
1、豬繁殖與呼吸綜合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndromevirus,PRRSV)引起的病毒性傳染病,PRRSV與豬肺泡巨噬細胞(porcine alveolarmacrophages,PAMs)之間的相互作用與疾病的發(fā)生密切相關(guān)。為了解PRRSV對仔豬固有
2、免疫應(yīng)答和適應(yīng)性免疫應(yīng)答的動態(tài)影響,檢測了PRRSV感染后PAMs免疫相關(guān)因子基因轉(zhuǎn)錄及其表達的動態(tài)變化。
選取5頭PCV2和PRRSV血清抗體和抗原均為陰性的35日齡斷奶仔豬,前腔動脈放血致死,無菌取出肺臟,灌洗出PAMs進行體外培養(yǎng),分為實驗組和對照組,實驗組接種PRRSV(GXBB株),對照組加等量1640細胞培養(yǎng)液,并分別于0h、12h、24h收取細胞,提取細胞總RNA并反轉(zhuǎn)為cDNA,用定量RT-PCR方法檢測了
3、PRRSV感染PAMs后免疫相關(guān)因子基因表達的動態(tài)變化。結(jié)果顯示,IL-2先上升后降低,24h時顯著低于對照組;IL-6mRNA水平接種PRRSV后逐漸升高,24h明顯高于同時間對照組;PRRSV可使PAMs表達IL-8逐漸降低,12h和24h均顯著低于對照組;PRRSV可逐漸上調(diào)體外培養(yǎng)PAMs IL-10的表達,24h時顯著高于同時間對照組;PAMs中TNF-α mRNA的表達在PRRSV的作用下逐漸上調(diào),12h和24h均顯著高于對
4、照組,說明PRRSV在引起一過性免疫增強后,可造成明顯的免疫抑制。
為進一步了解PRRSV對PAMs分泌細胞因子的動態(tài)影響,選取5頭PCV2和PRRSV血清抗體均為陰性的35日齡的斷奶仔豬,前腔動脈放血致死后,取出肺臟,無菌罐洗出肺泡巨噬細胞進行體外培養(yǎng),分為實驗組和對照組,實驗組接種PRRSV(GXBB株),對照組加等量1640細胞培養(yǎng)液,并分別于0h、12h、24h收取細胞培養(yǎng)上清液,用ELISA法檢測IL-6、IL-
5、10、TNF-a含量的動態(tài)變化,分析PRRSV對PAMs免疫功能的影響。結(jié)果顯示,PRRSV作用后12h和24h,PAMs培養(yǎng)上清液中IL-6和TNF-α含量均顯著高于對照組(p<0.05); PRRSV作用12h時攻毒組IL-10的含量較對照組高,而24h攻毒組IL-10的含量較對照組低,TNF-a在12h時顯著高于對照組(p<0.05),24h雖仍高于對照組,但差異不顯著(p>0.05)。由此可見,PRRSV在感染24h內(nèi),在激活體
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