1、傳染病的頻繁暴發(fā)嚴重制約養(yǎng)鵝業(yè)發(fā)展，主要原因是對其抗感染免疫機理知之甚少和防疫技術(shù)落后。系統(tǒng)研究 Toll樣受體（TLRs）在抗感染免疫過程中的作用不僅能為全面闡明鵝的免疫機理奠定基礎(chǔ)，還為品種（品系）的優(yōu)選及分子育種提供理論依據(jù)。本研究：利用聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)和cDNA末端快速擴增技術(shù)(Smart RACE)分別獲得鵝TLR3和TLR5的cDNA全長，預(yù)測其分子結(jié)構(gòu)特征；設(shè)計熒光定量PCR引物，檢測TLR3和TLR5在各組織器官

2、的表達；構(gòu)建真核表達載體與雙熒光報告基因系統(tǒng)共轉(zhuǎn)染HEK293細胞，通過特異性配體刺激檢測TLRs激活對核因子-B的活性影響；通過熒光定量PCR檢測不同微生物（配體）刺激鵝外周血單核細胞后TLRs及其下游炎性因子mRNA表達量的變化。研究結(jié)果表明：
　　（1）鵝TLR3 cDNA序列全長2874bp，包括149bp的5′非編碼區(qū)、34bp的3′非編碼區(qū)和編碼896個氨基酸的2691bp的開放閱讀框，分子量為102.13kDa、PI

3、為8.53。TLR3全長氨基酸序列包含1個信號肽、14個富含亮氨酸的重復(fù)序列(Leucine-rich Repeat，LRR)、1個跨膜結(jié)構(gòu)域和1個胞內(nèi) TIR結(jié)構(gòu)域(IL-R1 homologous region, TIR)。同源比對顯示，與雞TLR3具有較高的同源性(84.4％)。組織表達結(jié)果表明，TLR3在健康鵝的組織中分布廣泛，其中在胰腺、脾臟和十二指腸中表達量最高。雙熒光報告結(jié)果表明，鵝TLR3能在Poly i:c的刺激下引起

4、NF-?B的活化。禽流感病毒（H5N1）刺激鵝外周血單核細胞（PBMC）后，能引起TLR3、IL-6和IFN-?的mRNA表達顯著增加，而Poly i:c僅能引起TLR3和IFN-?的mRNA上調(diào)，且兩種刺激物均無法上調(diào)IL-1?的mRNA表達量。相關(guān)分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)TLR3的表達量與IFN-?mRNA表達量為正相關(guān)。
　?。?）鵝TLR5cDNA序列全長2967bp，包括215bp的5′非編碼區(qū)、384bp的3′非編碼區(qū)和編碼860

5、個氨基酸的2583bp的開放閱讀框，分子量為98.88kDa、PI為6.34。TLR5全長氨基酸序列包含1個信號肽、7個富含亮氨酸的重復(fù)序列、1個跨膜結(jié)構(gòu)域和1個胞內(nèi)TIR結(jié)構(gòu)域。同源比對顯示，與雞TLR5的同源性最高（81.3%）。組織表達分析顯示，TLR5在健康鵝的組織中具有較廣的表達分布，其中在腎臟和脾臟組織中表達量最高。雙熒光報告結(jié)果表明，鵝TLR5能在鞭毛蛋白（Flagellin）的刺激下引起NF-?B活化。沙門氏菌和鞭毛蛋白