1、胚胎期，雞的肝臟是其物質能量代謝最活躍的組織器官，并且肝臟是唯一一個所有能量代謝通路和代謝酶都有活性的器官[1]。在雞胚孵化的最后一周，肝臟的脂代謝非常活躍，比如運輸儲存從頭合成的甘油三酯和膽固醇，以及包裹形成極低密度脂蛋白和低密度脂蛋白。此時，雞的肝臟糖異生具有重要的作用，因為此時的雞胚肌肉生長迅速，且肌肉內糖原的存儲也顯著加強，而雞胚的肝臟糖異生是其葡萄糖的唯一來源。不同品種的雞，在生長和代謝等方面的表現都有很大的不同，但對于不同品

2、種雞胚胎期肝臟的能量代謝報道的不是很多。
　　近年，與肥胖相關的基因FTO被發(fā)現與能量代謝有很大的相關性，但研究幾乎集中在哺乳動物和人，禽類上的研究鮮有報道，且直接FTO功能的報道很少，因此本文將品種比較、相關性分析和細胞轉染兩個方面研究雞FTO的功能。
　　1.雞胚肝臟糖脂代謝相關基因和FTO表達的品種差異
　　選取快速生長型的白羽羅氏肉雞和慢速生長型的廣州溫氏黃羽肉雞種蛋，在標準條件下孵化，于18胚齡時采樣?？焖偕?/p>

3、長型肉雞的種蛋和18胚齡時的胚重均顯著高于慢速生長型肉雞的(P＜0.05)，18胚齡時血清和肝臟中的甘油三酯(Triglycerol，TG)含量均是快速生長型肉雞的顯著高(P＜0.05);血清中總膽固醇(Totalcholesterol，Tch)、高密度脂蛋白膽固醇（Highdensitylipoproteincholesterol，HDL-C）和低密度脂蛋白膽固醇（Lowdensitylipoproteincholesterol，LD

4、L-C）的含量均是快速生長型肉雞的顯著低于慢速生長型肉雞的(P＜0.05)，而肝臟中Tch的含量無品種差異;血清中葡萄糖（glucose）和乳酸(Lacticacid，LD)的含量是快速生長型肉雞的顯著高(P＜0.05);脂代謝相關基因的表達，脂肪合成的酶如脂肪酸合酶(Fattyacidsynthase，FAS)、乙酰輔酶A羧化酶（AcetylCoAcarboxylase，ACC）和蘋果酸酶(Malicenzyme，ME)以及固醇類調控

5、元件結合蛋白1(Sterolregulatorelementbindingprotein1，SREBP-1)的基因表達在品種間無顯著差異，但脂肪分解酶肉堿棕櫚酰轉移酶（Carnitinepalmitoyltransferase，CPT1）的基因表達是快速生長型肉雞的顯著高于慢速生長型肉雞的(P＜0.05);載脂蛋白B(ApolipoproteinB，ApoB)的基因表達則是快速生長型肉雞的顯著低(P＜0.05);固醇類調控元件結合蛋白2

6、(Sterolregulatorelementbindingprotein2，SREBP-2)和膽固醇分解的酶膽固醇-7α-羥化酶(Cholesterol-7alpha-hydroxylase，CYP7A1)的基因表達均表現為快速生長型肉雞的顯著低于慢速生長型肉雞的（P＜0.05）;同時，18胚齡時，快速生長型肉雞肝臟中胞漿型磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(Cytosolicformphosphoenolpyruvatecarboxykinas

7、e，PEPCK-c)和果糖-1，6-二磷酸酶(Fructose-1，6-bisphosphatase，FPB1)的基因表達均顯著高于慢速生長型肉雞的(P＜0.05)，但脂肪和肥胖相關基因FTO(fatmassandobesityassociatedgene，FTO)的基因和蛋白表達卻在兩品種間無顯著差異;進一步的相關性分析也沒有發(fā)現FTO的表達與糖脂代謝的相關基因表達間有顯著的相關性。結果提示，18胚齡時，快速生長型內雞肝臟脂代謝和糖異

8、生均較慢速生長型肉雞的活躍，而FTO的表達似乎與此沒有顯著的相關性。
　　2.雞胚肝臟糖異生品種差異的分子機制研究
　　我們之前的實驗發(fā)現，18胚齡時，快速生長型肉雞肝臟糖異生關鍵酶PEPCK-c的基因表達強于慢速生長型肉雞，但其表達的品種差異的具體機制尚不清楚，即為本部分的研究目的和內容。實驗首先預測了雞PEPCK-c基因啟動子上的CpG島和轉錄因子結合位點，接著發(fā)現轉錄因子cAMP反應元件結合蛋白(cAMPrespons

9、eelementbindingprotein，CREB1)的基因表達以及磷酸化的CREB1(pCREB1)的蛋白表達均為快速生長型肉雞的顯著高(P＜0.05);ChIP的結果顯示，快速生長型肉雞肝臟PEPCK-c基因啟動子上結合有較多的pCREB1（P=0.08）;而IP-IB的結果并未發(fā)現FTO可以和pCREB1結合;PEPCK-c基因啟動子的表遺傳修飾在兩個品種間亦表現有差異，即快速生長型肉雞PEPCK-c基因CpG島的甲基化水平和

10、組蛋白H3水平較低（P＜0.05），而組蛋白H3的乙?；℉istoneH3acetylation，H3ac）和組蛋白H3賴氨酸27三甲基化（TrimethylatedhistoneH3lysine27，H3K27me3）水平顯著地高(P＜0.05)。結果提示，18胚齡時，肉雞肝臟PEPCK-c表達的品種差異可能主要是由轉錄因子pCPEB1的調節(jié)引起的，而FTO尚未發(fā)現參與其中。
　　3.FTO基因的超表達和RNA干擾對雞胚成纖維

11、細胞DF-1的影響
　　有大量文獻報道，FTO與能量代謝相關，但研究集中在哺乳動物和人。而對于禽類，FTO有怎樣的生物學功能尚待研究。所以，本章選用雞胚成纖維細胞DF-1細胞系，并構建雞的FTO超表達質粒(F+)和干擾質粒(F-)進行轉染，觀察對DF-1細胞的影響。結果顯示，轉染24小時，FTO并不會對DF-1細胞的細胞活力造成影響;轉染后，F+組的FTO基因和蛋白表達均顯著高于對照組(P＜0.05)，F-組的表達則顯著低于對照組

12、(P＜0.05);F+組的糖皮質激素受體(Glucocorticoidreceptor，GR)、葡萄糖-6磷酸酶（Glucose-6-phosphatase，G6PC）和線粒體型的PEPCK(PEPCK-m)的基因表達均顯著高于對照組(P＜0.05)，而F-組這三個基因的表達則顯著低于對照組(P＜0.05);而與脂代謝、膽固醇代謝、胰島素通路、線粒體功能、氧化應激等相關的基因表達則無顯著的變化。以上結果提示，FTO可能主要是影響DF-1

13、細胞的糖異生功能。
　　4.FTO基因的超表達和RNA干擾影響DF-1細胞糖異生的機制研究
　　我們之前的實驗發(fā)現FTO對DF-1細胞的糖異生的幾個關鍵酶有影響，但機制如何尚不明了。本章同樣采取FTO超表達(F+)和干擾質粒(F-)對DF-1細胞進行轉染，發(fā)現轉染24小時，F+組細胞上清中的葡萄糖含量顯著低于對照組(P＜0.05)，乳酸含量則顯著高于對照組(P＜0.05)，F-組的這兩個指標則與對照組無顯著差異;DF-1細胞

14、中糖原含量表現為F+組顯著高于F-組(P＜0.05)，但F+組和F-組與對照組均無顯著差異;F+組G6PC的蛋白表達和酶活均顯著高于對照組(P＜0.05)，而F-組與對照組無差異。G6PC基因啟動子上的轉錄因子C/EBP-beta和CREB1的基因表達均為F+組的顯著高于對照組(P＜0.05)，而這兩個轉錄因子只有C/EBP-beta的基因表達在F-組中均顯著下調(P＜0.05);C/EBP-bcta和CREB1的蛋白表達在F+組顯著高

15、于對照組（P＜0.05），而這兩個蛋白在F-組均無顯著變化;ChIP實驗發(fā)現，G6PC基因啟動子上轉錄因子C/EBP-beta和pCREB1的結合在F+組顯著高于對照組(P＜0.05)，F-組pCREB1的結合顯著降低(P＜0.05)，而C/EBP-beta則無顯著變化;IP-IB結果顯示，F+組FTO結合了較多的C/EBP-beta蛋白，同時C/EBP-bcta也結合了較多的FTO蛋白（P＜0.05），即增強了二者的互作效應。以上結果