1、為優(yōu)化水牛類精原干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)體系，本研究對水牛A型精原細(xì)胞分離純化方法，體外增殖的影響因素及其生物學(xué)特性進(jìn)行了探討。
　　 (1)對3-7月齡本地水牛生精上皮細(xì)胞類型進(jìn)行了研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該時(shí)期的睪丸生精上皮主要存在三種類型細(xì)胞，即支持細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞和A型精原細(xì)胞。A型精原細(xì)胞存在于管腔基底膜處，細(xì)胞核大、著色較深。免疫組化染色的結(jié)果顯示，水牛A型精原細(xì)胞表達(dá)Oct-4、c-kit、PGP9.5、THY-1和DBA分子標(biāo)記

2、蛋白。通過RT-PCR也檢測到睪丸組織中有Oct-4、c-kit、PGP9.5和THY-1基因的表達(dá)。
　　 (2)對水牛生精上皮細(xì)胞的分離純化方法進(jìn)行了研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，采用膠原酶、胰蛋白酶兩步酶消化法消化曲精細(xì)管能成功得到大量的睪丸細(xì)胞，再通過差異貼壁法結(jié)合Percoll不連續(xù)密度梯度離心法可分離純化睪丸支持細(xì)胞與A型精原細(xì)胞。其中支持細(xì)胞表達(dá)其特異性波形蛋白，可用飼養(yǎng)層制作。
　　 (3)對水牛A型精原細(xì)胞體外培養(yǎng)特

3、征及類精原干細(xì)胞特性進(jìn)行了研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，A型精原細(xì)胞接種第2天后開始增殖，10-12天左右形成類精原干細(xì)胞克隆。克隆呈堿性磷酸酶染色陽性，表達(dá)Oct-4、c-kit、PGP9.5、THY-1精原干細(xì)胞特異性因子和牛生殖細(xì)胞特異表達(dá)的凝集素蛋白DBA。
　　 (4)探討了不同濃度血清和GDNF對A型精原細(xì)胞體外增殖效果的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著血清濃度的增高，細(xì)胞增殖速度加快，形成的DBA陽性克隆數(shù)也增多，最適宜血清添加量為2.5%