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![小鼠精原干細胞分離富集和培養(yǎng).pdf_第1頁](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-2/24/12/df3f7cf1-508f-4027-aa3b-1fe2c1ee99c9/df3f7cf1-508f-4027-aa3b-1fe2c1ee99c91.gif)
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文檔簡介
1、目的:成年小鼠睪丸中約有108個細胞,其中約有 2×104個是精原干細胞,僅占睪丸生精上皮細胞總數(shù)的 0.02~0.03%,精原干細胞數(shù)量太少不利于體外培養(yǎng)。分離和富集精原干細胞成為精原干細胞體外培養(yǎng)能否成功的前提條件。尋找分離和富集小鼠精原干細胞有效方法。 方法:出生6-8天小鼠為實驗對象,先用0.25%胰酶1mM EDTA消化睪丸10min,用胎牛血清終止消化,用一次40-um孔徑的濾器過慮制成單細胞懸液,30%percol
2、l不連續(xù)密度梯度法離心富集精原干細胞,再根椐未分化精原干細胞表面thy1.2(CD90.2)陽性CD117(c-kit)陰性特點用流式細胞儀將精原干細胞分選出來,并在體外進行培養(yǎng)嘗試。 結果:30%percoll密度梯度離心前CD117(c-kit)陽性細胞占13.80±3.34%,CD90.2陽性細胞占28.98±4.51%,二者都陽性細胞占8.98±2.98%,CD117陰性CD90.2陽性細胞占18.36±2.67%;離心
3、后 CD117(c-kit)陽性細胞占12.37±3.34%,CD90.2陽性細胞占56.98±4.51%,二者都陽性細胞占8.20±3.98%,CD117陰性CD90.2陽性細胞占32.36±3.67%;CD117(c-kit)陽性細胞和二者都陽性細胞所占百分比前后比較差異無顯著性(P>0.1),CD90.2陽性細胞和CD117陰性和CD90.2陽性細胞所占百分比前后比較差異有顯著性(P<0.05);采用CD117和CD90.2作為標
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