1、豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)是20世紀(jì)80年代末發(fā)現(xiàn)的一種高度傳染性疾病，引起妊娠母豬的流產(chǎn)、死胎、木乃伊胎等繁殖障礙，以及各種年齡豬(特別是仔豬)的呼吸道癥狀，其病原為豬生殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)。PRRSV基因組長約15 kb，包括8個開放閱讀框(ORFs)。 本研究用Marc-145細(xì)胞從河南地區(qū)發(fā)病豬場采集的病料樣本中分離到一株豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)，采用RT-PCR方法對分離到毒株進(jìn)行了初步鑒定

2、，將其在Marc-145細(xì)胞上增殖并測定其TCID50。分段設(shè)計引物，采用RT-PCR方法分別擴(kuò)增并克隆此毒株的所有cDNA片段，獲得其全基因組序列。將此分離毒株命名為Henan-1。用DNAMAN和DNAStar軟件將Henan-1毒株的基因組序列與GenBank中其它國內(nèi)外分離毒株的已知序列進(jìn)行相關(guān)分析。序列分析表明此分離毒株為美洲型PRRSV。 1.將采集到的肺臟等病料經(jīng)過研磨、過濾等處理后，接種于狀態(tài)良好的單層平整的Ma

3、rc-145細(xì)胞，在接種72 h后出現(xiàn)明顯的細(xì)胞聚集成叢、隨后固縮、變圓、脫落等細(xì)胞病變，并通過RT-PCR方法確定了病毒在Marc-145細(xì)胞上的增殖。將此分離到的PRRSV命名為Henan-1。測定此分離毒株第三代細(xì)胞毒的病毒滴度為104.8 TCID50/ml。 2.PRRSV全基因組長15kb，分段設(shè)計22對引物，利用分離株的傳代細(xì)胞毒，通過RT-PCR方法，分段擴(kuò)增出PRRSV Henan-1的全基因cDNA片段，分別

4、將其克隆到pMD18-T載體中，對鑒定為陽性的重組質(zhì)粒進(jìn)行測序，獲得Henan-1的全基因組序列。利用DNAMAN和DNAStar軟件將Henan-1毒株的全基因組序列與GenBank中其它國內(nèi)外分離毒株的已知序列進(jìn)行序列分析，其結(jié)果顯示Henan-1毒株與國內(nèi)外各美洲型分離株全序列同源性在88.8％～99.3％，而與歐洲型分離株LV株的差異較大，同源性為50.5％。表明Henan-1為美洲型毒株。Henan-1株與VR-2332毒株相