1、夏眠是刺參(Apostichopus japonicus)在高溫環(huán)境的一種休眠狀態(tài),本文研究了在實驗性夏眠條件下刺參組織代謝變化規(guī)律和調(diào)控因素以及基因表達的變化,主要內(nèi)容包括(1)溫度變化對刺參代謝酶、消化酶、抗氧化能力的影響、(2)溫度變化對刺參生物胺含量的影響、(3)溫度變化對信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響、(4)溫度變化對基因表達的影響。
　　1、研究了在溫度變化下刺參組織代謝酶、腸道消化酶和體腔液抗氧化系統(tǒng)的變化規(guī)律。結(jié)果表明,實驗組

2、體壁GDH和PK活力呈峰值變化,分別于8、lOd時達到最小值,10d后逐漸升高,至20d時GDH、PK活力分別低于和高于對照組水平,并與溫度呈明顯的負、正相關(guān)性;呼吸樹G-6-PDH、GDH和PK活性均隨溫度升高而增大,ST實驗組分別在10、8、6d達到最大值,LT實驗組均在10d達到最大值,溫度穩(wěn)定后G-6-PDH活性保持穩(wěn)定,而GDH和PK活性一直降低。溫度變化對胰蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性影響顯著,溫度升高時淀粉酶和脂肪酶活性降低

3、,而胰蛋白酶活性先升高后降低。體腔液總抗氧化能力隨溫度變化呈峰值變化,兩個實驗組分別在6、8d達到最大值;SOD活性隨溫度升高顯著降低于6d達到最小值并保持穩(wěn)定;GSH/GSSG比值在溫度升高時高于對照組,至20d時低于對照組,但變化不顯著。
　　2、研究了在實驗性溫度變化下刺參體腔液、體壁、呼吸樹生物胺含量的變化。體腔液NE、DA隨溫度呈峰值變化,兩實驗組分別在6、10d達到最小值、最大值,到20d時除LT實驗組NE低于對照組外

4、均與對照組無顯著差異,5-HT含量呈降低趨勢,至20d時實驗組與對照組相差顯著;各實驗組在實驗時間內(nèi)體壁DA、5-HT和NE含量均呈峰值變化,分別于10d、6d時達到最大值、最小值,5-HT含量在6-10d內(nèi)趨于穩(wěn)定,10d后5-HT、NE含量恢復(fù)至對照組水平,而DA含量與溫度呈顯著的正相關(guān)性;呼吸樹NE、DA、5-HT隨溫度變化呈峰值變化,分別在10d時達到最小值、最大值,并與溫度呈負、正相關(guān)性,至20d時NE含量顯著低于對照組,ST

5、實驗組DA與對照組無差異而LT實驗組高于對照組;5-HT低于對照組并與溫度呈負相關(guān)。
　　3、研究了在實驗性溫度變化下刺參體壁和呼吸樹信號通路因子的變化。兩實驗組體壁AMP、cGMP含量和PKA、PKG活力均呈峰值變化。其中體壁cAMP含量均于6d時達到最小值,并保持穩(wěn)定,而cGMP含量分別于8、10d時達到最小值,cAMP、cGMP含量在10-20d內(nèi)均逐漸升高,恢復(fù)至對照組水平;PKA活力均于6d時達到最小值并保持穩(wěn)定,PKG

6、活力分別于8、10d時達到最小值,10d后ST實驗組PKA、PKG活力恢復(fù)至對照組水平,而LT實驗組分別低于和高于對照組水平。兩實驗組呼吸樹cAMP分別在8、10d達到最大值,而cGMP則在10d達到最大值,并且與溫度呈正相關(guān)性;溫度穩(wěn)定后含量降低,至20d時ST實驗組cAMP恢復(fù)至對照組水平,LT實驗組高于對照組,而cGMP則分別低于和高于對照組。呼吸樹PKA、PKG活力變化與體壁不同,與溫度呈正相關(guān)性,兩個實驗組PKA分別在8、10

7、d達到最大值,PKG則均在10d達到最大值;10-20d內(nèi)活力均降低,至20d時兩個實驗組PKA分別恢復(fù)至對照組和高于對照組水平,而PKG則分別低于和高于對照組水平
　　4、應(yīng)用SSH技術(shù)篩選了刺參在實驗性夏眠條件下腸道差異表達基因,以正常生長刺參提取的mRNA為“driver”,夏眠中刺參提取的mRNA為“tester”得到一個容量約為500的陽性克隆文庫,測序后得到309個有效EST序列,應(yīng)用Blast2Go軟件分析115個E