辣椒高效離體再生體系建立與CaCOI1基因的功能研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、辣椒為茄科中的一種重要物種,在世界范圍廣泛栽培。然而生物和非生物脅迫以及辣椒自身基因的易損性大大限制了辣椒生物技術的發(fā)展。通過基因工程生物技術對辣椒進行定向改造是辣椒育種的有效方法。離體再生技術與遺傳轉化技術促進了傳統(tǒng)農(nóng)作物育種技術的發(fā)展,同時還能改良辣椒性狀。但由于辣椒較其它茄科植物再生困難,導致在利用DNA重組技術改良辣椒對生物和非生物脅迫抗性時增加了難度。
   本研究以辣椒常規(guī)品種新蘇椒王為實驗材料,利用均勻設計法比較系

2、統(tǒng)地研究了辣椒離體再生的因素,如外植體類型、苗齡、外源生長物質(zhì)種類濃度以及搭配等,建立了辣椒子葉高效離體再生體系,為辣椒遺傳轉化奠定基礎。結果表明辣椒種Capsicumannuumvar.annuum(cv.Xinsu)的最佳外植體為幼苗子葉,而最佳苗齡為12天;最佳不定芽分化培養(yǎng)基為MS+IAA5.71μM+BA22.20μM+AgNO329.43μM,誘導率達99.20%;最佳延長培養(yǎng)基為MS+IAA5.71μM+BA4.44μM+

3、AgNO329.43μM+GA35.77μM,延長率達86.67%;最佳生根培養(yǎng)基為MS+0.57μMIAA+0.69μMNAA,生根率達98.33%。通過試驗證明成功建立了辣椒植株再生體系。
   COI1,基因是至今為止JA信號傳導途徑中分離克隆鑒定的唯一信號基因,也是目前研究所發(fā)現(xiàn)的擬南芥JA信號傳導鏈中最重要的調(diào)控基因。COI1編碼一個F-box蛋白,是SCFCOI1復合物的一個亞基,COI1與植物的育性和抗性兩類完全不

4、同的性狀有關。COIl蛋白同生長素信號鏈中的TIR1蛋白類似,可調(diào)控辣椒的正常生理發(fā)育。我們從辣椒EST數(shù)據(jù)庫中分離克隆了與番茄COI1,高度重復的部分片段,命名為CaCOI1。并對其作生物信息學分析其功能。并利用熒光定量PCR對CaCOI1基因做了表達模式分析,利用雙元表達載體PBIN19構建了CaCOI1的沉默載體,通過農(nóng)桿菌介導法轉化辣椒。經(jīng)驗證后發(fā)現(xiàn)轉基因辣椒都出現(xiàn)PCR目的條帶,并發(fā)現(xiàn)轉基因辣椒沉默株系部分雄性不育,果實偏小,

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