1、馬鈴薯(Solanum tuberosumL.)淀粉在食品及化工領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用價(jià)值，淀粉的糊化和凝沉特性是其應(yīng)用的重要參考指標(biāo)。支鏈淀粉具有易糊化、不易老化等特性，被廣泛應(yīng)用于造紙業(yè)、紡織業(yè)和粘膠劑生產(chǎn)等領(lǐng)域；直鏈淀粉常被用作脂肪替代物。馬鈴薯病毒病是影響馬鈴薯產(chǎn)量和品質(zhì)的重要病害，尤其是馬鈴薯Y病毒(PVY)、馬鈴薯X病毒(PVX)和馬鈴薯卷葉病毒(PLRV)。目前，利用分子生物學(xué)方法調(diào)控作物淀粉合成過(guò)程中相關(guān)酶基因的表達(dá)以及沉默

2、病毒基因，從而降低淀粉糊化溫度與改善凝成性，實(shí)現(xiàn)植物抗病。本文利用RNA干擾技術(shù)通過(guò)調(diào)控馬鈴薯塊莖中顆粒結(jié)合性淀粉合成酶基因(Granule-bound starch synthase，GBSS)的表達(dá)，抑制直鏈淀粉的合成，同時(shí)干擾病毒外殼蛋白基因的表達(dá)，獲得了含高直鏈淀粉且抗病毒的轉(zhuǎn)基因馬鈴薯植株。
　　 本文第一部分內(nèi)容是構(gòu)建含有一種或多種病毒外殼蛋白基因與GBSS基因片段的RNAi載體，并通過(guò)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化馬鈴薯，獲得馬鈴薯轉(zhuǎn)

3、化株，通過(guò)PCR鑒定篩選陽(yáng)性克隆，利用Real-timePCR檢測(cè)轉(zhuǎn)基因植株GBSS表達(dá)量，獲得GBSS沉默效率達(dá)98.21％的轉(zhuǎn)基因馬鈴薯，碘染色轉(zhuǎn)基因試管薯淀粉顆粒，GBSS沉默效率為98.21％的轉(zhuǎn)基因試管薯淀粉顆粒為紅褐色，非轉(zhuǎn)基因試管薯淀粉顆粒為藍(lán)色。選取GBSS沉默效率高于80％的轉(zhuǎn)基因植株4株、60％-75％的轉(zhuǎn)基因植株2株、低于50％的轉(zhuǎn)基因植株2株進(jìn)行病毒接種，經(jīng)Real-timePCR檢測(cè)轉(zhuǎn)基因植株中：PVY的積累量

4、，GBSS沉默效率為98.21％的轉(zhuǎn)基因植株抗PVY效率為100％，從而獲得了含高支鏈淀粉的抗病毒轉(zhuǎn)基因馬鈴薯。
　　 本文第二部分內(nèi)容是通過(guò)刪除載體中的選擇標(biāo)記基因，獲得了無(wú)選擇標(biāo)記載體，分別構(gòu)建以GBSS基因啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的GBSS基因中端反義序列，CaMV35S啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的GBSS基因中端反向重復(fù)序列的兩種無(wú)篩選標(biāo)記載體，通過(guò)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化馬鈴薯植株，共獲得了455株馬鈴薯轉(zhuǎn)化株，經(jīng)PCR鑒定得到陽(yáng)性轉(zhuǎn)基因植株1株，通過(guò)Real-