1、布魯氏菌病（Brucellaabortus）是革蘭氏陰性菌，專性細胞內寄生，可感染人類及多種動物引起發(fā)熱、流產、不育、慢性關節(jié)炎及神經損傷等，導致世界范圍嚴重的經濟損失和公共衛(wèi)生問題。目前尚沒有有效的防治手段，疫苗接種是預防該病的主要手段。蘚醇激酶（ery）是流產布魯氏菌的毒力基因，本研究通過對牛種布魯氏菌S2308株ery啟動子基因敲除構建ery啟動子基因缺失株，觀察是否可降低毒力；評價該缺失株作為疫苗候選株的價值；同時表達了eryA

2、蛋白，為區(qū)別布魯氏菌自然感染與疫苗免疫提供包被抗原；另外，S19疫苗株在防治牛布病方面取得明顯的效果，但是牛種布魯氏菌疫苗S19免疫懷孕的動物可能導致其流產，且常規(guī)的血清學檢測與診斷方法不能將其與自然感染相區(qū)分，這對我國布病的防治與凈化是不利的。前期研究表明布魯氏菌WboA基因編碼糖基轉移酶，是合成LPSO-側鏈多糖的必需基因之一，M5-90wboA敲除株可以區(qū)別自然感染和疫苗感染。但M5-90敲除WboA株保護率比親本株降低10％本研

3、究擬對S19wboA基因的抗原表位分析并構建自殺載體為S19疫苗株的進一步改造提供科學依據。
　　本研究以滅活的流產布魯氏菌S2308株為模板，擴增赤蘚醇激酶（ery）啟動子基因的上下游同源臂序列；以枯草芽孢桿菌為模板，擴增SacB基因序列。將擴增好的序列分別連接到自殺載體pGEM-7Zf+上，成功構建了pGEM-7Zf-ery-sacB自殺載體，將構建好的載體命名為：pes，然后將pes電轉至流產布魯氏菌S2308株感受態(tài)細胞，

4、通過同源重組的方法成功構建S2308ery啟動子基因缺失株，命名為：S2308Δery，對S2308Δery株進行了遺傳穩(wěn)定性檢測，傳至15代遺傳穩(wěn)定。用S2308Δery株侵染胚胎滋養(yǎng)層細胞，細胞脫落結果顯示：S2308Δery株的毒力較親本S2308株明顯下降，其毒力與S19株相當。該缺失株通過缺失S2308ery啟動子基因，將ery整個開放閱讀框失活，為S2308株向疫苗株的改造奠定基礎。
　　用DNAman和GENGrun

5、ner對wboA基因進行了抗原表位分析，選取抗原表位1（w-1）、抗原表位2(w-2)、抗原表位1和2（w-1-2）及wboA作為本試驗的研究對象。以滅活的S19為模板，成功擴增了wboA基因及其3個抗原表位基因；以滅活的流產布魯氏菌S2308株為模板，成功擴增了eryA基因。本試驗成功構建了wboA基因及其抗原表位基因和eryA基因的原核表達載體，IPTG誘導表達，SDS-PAGE凝膠電泳顯示：wboA基因及其抗原表位基因和eryA基

6、因蛋白在原核表達載體中成功表達；westernblot分析結果顯示：wboA基因及其抗原表位基因和eryA基因具有良好的免疫反應性。對wboA及其抗原表位蛋白和S2308株eryA蛋白進行了純化。wboA及其抗原表位蛋白為后續(xù)的S19疫苗改造以及相應相應缺失株的血清學的鑒別診斷奠定了基礎。eryA蛋白為S2308Δery株的血清學鑒別診斷奠定了基礎。
　　對wboA及其抗原表位基因的上下游同源臂基因進行了擴增，擴增了負篩選標記Sa