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文檔簡介
1、精胺(Spm)、亞精胺(Spd)和它們的二胺前體腐胺(Put)是小分子脂肪族多聚陽離子,廣泛存在于植物細胞中,與植物生長發(fā)育、形態(tài)建成和對逆境響應密切相關。一氧化氮(NO)是一種植物細胞信號分子,在調節(jié)種子萌發(fā)、根系發(fā)育、氣孔關閉、防御基因的表達和程序性細胞死亡過程中起著關鍵作用。業(yè)已證實,多胺可誘導植物組織產(chǎn)生NO,然而誘導機理仍不清楚。多份研究報告指出,植物組織的多胺氧化酶在多胺誘導NO產(chǎn)生中有作用,然而仍缺乏相關的理化證據(jù)。
2、> 本研究以大豆子葉節(jié)愈傷組織懸浮細胞為材料,采用外源多胺(PAs)、多胺氧化酶抑制劑-氨基胍(AG)、哺乳動物細胞一氧化氮合酶抑制劑L-NAME、H2O2清除劑(CAT、POD)、化學性缺氧劑-連二亞硫酸鈉(SDT)及H2O2淬滅劑-二甲基硫脲(DMTU)處理,以DAF-FMDA為NO專性熒光探針,用激光共聚焦掃描顯微技術,檢測多胺誘導大豆子葉節(jié)愈傷組織懸浮細胞產(chǎn)生NO的變化。結果表明:
?。?)三種外源多胺(0.05 mM
3、腐胺、亞精胺和精胺)都可迅速地誘導大豆子葉節(jié)愈傷組織懸浮細胞產(chǎn)生NO熒光,且沒有遲后期。
?。?)在多胺孵育的同時添加NO專性清除劑0.1 mM cPTIO(2,4-羧基苯-4,4,5,5-四甲基咪唑-1-氧-3-氧化物),可強烈抑制細胞的 NO熒光,表明此熒光的NO特性。
?。?)在多胺處理前用多胺氧化酶抑制劑AG孵育,可消弱細胞的NO熒光,相對應的是細胞二胺氧化酶(CuAO)活性被強烈抑制;而用1.0mM L-NAM
4、E孵育細胞,細胞NO熒光可被抑制但不影響CuAO活性。
?。?)用0.1mM CAT和0.05mM DMTU二種H2O2清除劑處理懸浮細胞,都可明顯減弱大豆懸浮細胞產(chǎn)生的NO熒光,而0.1mM POD消弱作用不明顯。
?。?)用化學性缺氧劑SDT處理,使細胞處于厭氧狀態(tài),發(fā)現(xiàn)可明顯抑制大豆子葉節(jié)愈傷組織懸浮細胞NO熒光產(chǎn)生,熒光強度隨SDT濃度的增加而下降。而SDT對NO供體硝普鈉(SNP)所誘導的NO熒光無明顯的抑制作
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