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![家蠶兩種乙酰膽堿酯酶基因的互作與功能研究.pdf_第1頁](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/1/9/84ccebbc-8cb9-4136-b704-a8bc1b96d6ba/84ccebbc-8cb9-4136-b704-a8bc1b96d6ba1.gif)
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文檔簡介
1、乙酰膽堿酯酶(acetylcholinesterase,AChE)是昆蟲神經(jīng)傳導(dǎo)中的一種關(guān)鍵酶,在神經(jīng)突觸間通過催化神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿來維持神經(jīng)沖動的正常傳遞。AChE是由乙酰膽堿酯酶基因(acetylcholinesterase gene,ace)編碼,鱗翅目昆蟲的AChE由兩種類型ace(ace1和ace2)編碼。為了研究家蠶Bm-ace1和Bm-ace2兩種基因的互作及功能,本文通過采用RNAi的方法,分別在細(xì)胞水平和個體水平進(jìn)行研
2、究,結(jié)果如下。
在家蠶細(xì)胞系(BmN)中分別抑制ace1和ace2,運(yùn)用適時熒光定量PCR檢測經(jīng)RNAi后ace1和ace2的轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平,并測定了AChE的活性。同時,還研究了BmN在感染家蠶核型多角體病毒(Bombyx mori nuclear polyhedrosis virus,BmNPV)后不同時段的ace1和ace2轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果表明,當(dāng)ace1的表達(dá)被抑制到37.5%時,ace2的表達(dá)量上升為166%;當(dāng)ac
3、e2的表達(dá)被抑制到33.4%時,ace1的表達(dá)量也下調(diào),為對照的26.7%。AChE活性測定結(jié)果表明,當(dāng)抑制ace1時,AChE酶活是對照的103%,當(dāng)抑制ace2時,酶活降低,為對照的86.2%,AChE活性的變化趨勢和基因沉默的規(guī)律一致。BmNPV感染BmN后,ace1表現(xiàn)逐漸上升的趨勢,ace2的表達(dá)呈下調(diào)趨勢。結(jié)果揭示,在BmN中,ace2擔(dān)任重要的角色,可以在ace1被沉默后,通過提高ace2的轉(zhuǎn)錄水平維持體系A(chǔ)ChE活性相對
4、穩(wěn)定;ace2被沉默后對ace1的轉(zhuǎn)錄表達(dá)也產(chǎn)生影響;在BmN感染BmNPV后,ace1的表達(dá)可能和細(xì)胞凋亡有關(guān)。
在個體水平,研究了RNAi后家蠶腦、脂肪體、中腸和絲腺四種組織中ace1、ace2基因的互作,并測定了AChE活性和蟲體對辛硫磷的抗性差異。結(jié)果表明:在腦組織中,當(dāng)ace1的表達(dá)量抑制為對照的14.8%,ace2的表達(dá)量為對照的3.12倍;當(dāng)ace2的表達(dá)量抑制為對照的22.1%,ace1的表達(dá)量為對照的5.
5、8%;在中腸,絲腺和脂肪體中,當(dāng)ace1被抑制后ace2也存在下調(diào)趨勢。同時注射siRNA-ace1和siRNA-ace2后,ace1、ace2的表達(dá)量均下降,較單獨(dú)注射時表達(dá)量變化幅度小。AChE活性測定表明,腦組織較其他組織的酶活性高,當(dāng)抑制ace1時,酶活無顯著變化;當(dāng)抑制ace2時,活性下降,為對照的73.5%;在中腸和絲腺中,抑制ace1或抑制ace2,酶活均有顯著下降;脂肪體中,酶活力表現(xiàn)下降但不顯著。4種組織中,當(dāng)ace1
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