1、<p><b>　　遺傳育種研究及現(xiàn)狀</b></p><p>　　摘要:微衛(wèi)星DNA標記技術與AFLP標記技術是遺傳育種研究中最常用的兩種技術，本文也將從其在幾種不同物種間的研究方法及現(xiàn)狀向大家具體介紹這兩種技術。</p><p>　　微衛(wèi)星DNA是一類由1一6個核昔酸為重復單元而形成的申聯(lián)重復序列，由于它具有含量豐宮、多態(tài)性高、共顯性等優(yōu)點，而廣泛應用于

2、鑒定親緣關系、構建遺傳圖譜、數(shù)量性狀位點(QTL)定位、遺傳多樣性估計、標記輔助選擇等方面。本文就徽衛(wèi)星標記在羊、蜜蜂、家兔等家畜的遺傳育種中的應用進行概述。</p><p>　　AFLP標記是一種新的DNA分子標記技術。本文對AFLP標記的基本原理、技術流程和關鍵技術做了簡要介紹,從親緣關系與遺傳多樣性分析、遺傳圖譜的構建、特定性狀的連鎖標記、品種純度鑒定與QTL分析等方面概述了AFLP標記在大白菜遺傳育種中的

3、應用進展,并對其應用前景進行了展望。</p><p>　　關鍵詞：遺傳育種 微衛(wèi)星 羊 蜜蜂 家兔 AFLP標記 蠶豆</p><p>　　微衛(wèi)星DNA標記技術簡介</p><p>　　微衛(wèi)星（Microsatellite），又稱簡單序列重復(Sim-ple Sequence Repeat,SSR)、短串聯(lián)重復序列長度多態(tài)性（Short Tandem Rep

4、eat Polymorphisms,STRs），由核心序列和兩側(cè)的側(cè)翼序列所構成，核心序列一般由1～6bp的短核苷酸組成，呈10～60次串聯(lián)重復狀隨機分布于生物體整個基因組，其重復數(shù)的差異則形成微衛(wèi)星高度的多態(tài)性，側(cè)翼序列使微衛(wèi)星特異地定位于染色體某一部位。微衛(wèi)星標記作為第二代分子遺傳標記，具有分布廣泛、多態(tài)信息含量高、呈共顯性遺傳及檢測快速方便等優(yōu)點，在構建遺傳連鎖圖譜、評價遺傳多樣性和群體進化、繪制系統(tǒng)發(fā)生樹、血緣關系鑒定、核基因組

5、研究以及基因定位等研究中得到廣泛的應用。</p><p>　　微衛(wèi)星ONA在羊遺傳育種中的應用</p><p>　　1良種登記、系譜記錄的建立、個體及親緣關系鑒定</p><p>　　用微衛(wèi)星作為探針與基因組DNA雜交獲得的DNA指紋圖都具有程度不等的個體特異性，可準確地反映個體的遺傳特性，因而可作為家畜個體識別的可靠遺傳標記，用于建立優(yōu)良畜禽個體檔案，準確地記錄系

6、譜。</p><p><b>　　2 作DNA指紋圖</b></p><p>　　應用于畜禽遺傳育種的微衛(wèi)星DNA指紋圖主要反映了基因組中微衛(wèi)星DNA的變異情況，而非一序列的變異情況。</p><p>　　3 定位功能基因和QTL、構建基因圖譜</p><p>　　利用微衛(wèi)星位點和某些功能基因位點或QTL間的連鎖關系，可

7、將一些功能基因定位在染色體上或連鎖群中，這方面的研究在畜禽中己有很多報道。</p><p>　　4 群體遺傳結構和遺傳多樣性分析</p><p>　　微衛(wèi)星多態(tài)性分析還在畜禽遺傳多樣性評估、品種資源的分類、保存和利用等方面發(fā)揮著重要作用。</p><p>　　5 品或品純的測定關確定</p><p>　　用微衛(wèi)星所作的DNA指紋圖上由十多個，

8、甚至幾十個位點的等位基因組成，對基因組的代表性明顯高于其他任何單個遺傳標記，能夠正確反映畜禽品種間的遺傳關系以及品種或品系的近交程度。</p><p>　　6 重要經(jīng)濟性狀微衛(wèi)星標記的開發(fā)利用、早期選擇和標記輔助選擇</p><p>　　將遺傳標記與染色體圖譜相結合，可快速、準確地定位與生產(chǎn)性狀有關的目的基因。</p><p><b>　　7 雜交優(yōu)勢預測

9、</b></p><p>　　雜種優(yōu)勢大小在一定程度上取決于親本間遺傳差異大小，即遺傳距離。</p><p>　　8 監(jiān)測育種和遺傳操作效應</p><p>　　在畜禽的常規(guī)育種中，常通過多代回交將某一品種(供體)某個性狀基因滲入到另一品種(受體)的基因組中，同時將供體的其他基因剔除出受體品種。</p><p>　　微衛(wèi)星ONA在

10、蜜蜂遺傳育種中的應用</p><p><b>　　1群體遺傳結構分析</b></p><p>　　1.1起源進化及分類；1.2遺傳多樣性研究</p><p>　　2親子鑒定和血緣控制</p><p>　　2.1親緣鑒定、社會結構和血緣控制；2.2種群雜合度檢測、基因侵入和保種計劃</p><p>

11、<b>　　3數(shù)量性狀連鎖標記</b></p><p><b>　　4基因圖譜的構建</b></p><p><b>　　5雜種優(yōu)勢預測</b></p><p>　　微衛(wèi)星ONA在家兔遺傳育種中的應用</p><p><b>　　1鑒定親緣關系</b>&l

12、t;/p><p><b>　　2構建遺傳圈譜</b></p><p>　　3數(shù)性狀位點QT定位</p><p><b>　　4遺傳多樣性估計</b></p><p><b>　　5標記輔助選擇</b></p><p>　　綜上所述，微衛(wèi)星DNA作為遺傳標記與

13、盯LP、RAPD和小衛(wèi)星DNA相比，由于其數(shù)量大、分布廣、分布均勻、多態(tài)信息含量高等特點，是動物遺傳育種中一種極有用的分子標記。但由于其研究起步較晚，現(xiàn)已知的微衛(wèi)星位點還不夠多，以及其分析成本較高等原因，就仍需我們進一步研究，使之成為一種簡捷、靈敏、低廉的重要遺傳分析方法。微衛(wèi)星標記在評估蜜蜂群體的遺傳多樣性、估測遺傳距離、構建群體間親緣關系等方面顯示出了很強的優(yōu)越性，它也成為蜜蜂傳育種研究領域的一種強有力的工具。目前微星DNA標記是兔

14、遺傳育種種極有用途的分子標記。但不管與其它動物相比，還是從研究取得的成果來看，對家兔的微衛(wèi)星的研究均較少?，F(xiàn)在已知的兔的微衛(wèi)星位點很少，還有此項技術本身的一些缺點，仍需進一步將先進的微衛(wèi)星分析方法應用到其研究中去，以期發(fā)現(xiàn)更多的微衛(wèi)星標記，更有效地利用微衛(wèi)星標記發(fā)掘兔的優(yōu)良特性，改良和提高家兔品種的生產(chǎn)性能，提出合理的保種措施。</p><p>　　AFLP標記技術簡介</p><p>　

15、　AFLP技術是一種基于PCR技術的分子標記，它是在DNA分子水平上進行的多態(tài)性研究，在一次試驗中可同時檢測到大量DNA多態(tài)性片段，有助于遺傳差異的完全綜合和在相似群體中進一步分類，對作物的種質(zhì)資源多樣性檢測及系統(tǒng)進化、分類研究具有重要意義。本文會介紹AFLP分子標記技術及其在蠶豆遺傳育種研究中的應用。</p><p>　　1 AFLP分子標記技術概述</p><p><b>　

16、　基本原理</b></p><p>　　AFLP（Amplified fragment length polymor-phism）是1992年由荷蘭科學家Vos和Zabeau發(fā)展起來的一種檢測DNA多態(tài)性的新方法。與RFLP類似，AFLP也是通過限制性內(nèi)切酶酶切片段的不同長度檢測DNA多態(tài)性的一種DNA分子標記技術［1，2］。AFLP是通過PCR反應先把酶切片段擴增，然后把擴增的酶切片段在高分辨率的順

17、序分析膠上進行電泳，多態(tài)性即以擴增片段的長度不同檢測出來（圖1）。其基本流程包括3個步驟：①基因組DNA用限制性內(nèi)切酶酶切后，與特定的AFLP寡聚核苷酸接頭（A daptor）連接，形成一個帶接頭的特異片段。限制性酶切片段用兩種酶切割產(chǎn)生，一種是切割位點少的識別位點為6個堿基的內(nèi)切酶（如EcoRⅠ），一種是切割位點多的識別位點為4個堿基的內(nèi)切酶（如MseⅠ）。②通過接頭序列和鄰近的限制性內(nèi)切酶酶切位點序列作為引物結合位點，以引物3′端的

18、識別進行PCR選擇性擴增限制性酶切片段，可使目的序列大量擴增。③用變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，通過放射自顯影、熒光標記或核酸銀染檢測。</p><p><b>　　主要特點</b></p><p>　　AFLP作為一種新興的分子標記技術兼有RFLP技術的可靠性和PCR技術的高效性，具有快速、靈敏、穩(wěn)定、所需DNA量少、多態(tài)性檢出率高、重復性好、適應性廣、可以在不知道基

19、因組序列特點的情況下進行研究等優(yōu)點［3］，所以被認為是一種十分理想的、有效的、先進的、最有力的分子標記技術。</p><p>　　2 AFLP標記在蠶豆遺傳育種中的應用</p><p>　　1 種質(zhì)資源多樣性分析與品種分類研究</p><p>　　種質(zhì)資源和育種群體的遺傳變異信息是植物育種的基礎，對群體多態(tài)性的評價、育種群體的區(qū)劃和遺傳力的估測有重要作用。</

20、p><p><b>　　2 構建指紋圖譜</b></p><p>　　傳統(tǒng)的蠶豆雜交育種，雜交親本的選擇主要是根據(jù)親本的形態(tài)性狀和育種工作者長期的實踐經(jīng)驗。</p><p><b>　　3 構建遺傳圖譜</b></p><p>　　遺傳圖譜的構建是當前分子遺傳研究的熱點，從種質(zhì)資源利用角度講，一個高密度

21、的遺傳圖譜能有效地用于控制重要經(jīng)濟或農(nóng)藝性狀基因的定位，加快育種進程。</p><p>　　4 AFLP標記輔助選擇育種</p><p>　　蠶豆傳統(tǒng)育種方法主要包括引種鑒定利用和系統(tǒng)育種、雜交育種。</p><p>　　綜上所述，AFLP作為第三代分子標記技術與其他傳統(tǒng)標記（RFLP和RAPD）相比較試驗結果穩(wěn)定可靠，并能獲得大量的遺傳信息。AFLP分子標記技術

22、具有更高的可靠性和高效性，更容易從分子水平上為蠶豆遺傳多樣性研究提供可靠、有力的證據(jù)來研究蠶豆親緣關系。從科學、高效、持續(xù)發(fā)展的觀點看，AFLP作為一項新的分子標記技術應用于蠶豆遺傳育種工作中，對于青海蠶豆高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)良種選育、分類研究以及親緣關系的鑒定都具有重大意義。</p><p>　　國內(nèi)外遺傳育種的研究現(xiàn)狀：</p><p>　　我國不結球白菜育種存在問題與展望</p>

23、<p>　　1種質(zhì)資源保護亟待加強 </p><p>　　我國是不結球白菜種質(zhì)資源大國，有眾多的地方品種。隨著工業(yè)化進程、城市化發(fā)展、南北交流日益頻繁、新品種的不斷育成及推廣，很多特色地方品種栽培面積逐年縮小，有逐漸消亡的趨勢。種質(zhì)資源是育種的必備材料，收集、整理、利用和保存是當務之急。</p><p>　　2雜交一代制種成本過高 </p><p>　　

24、不結球白菜在我國南方栽培面積較大，但栽培管理粗放，加之用種量大，留種容易，因此，在生產(chǎn)上，農(nóng)戶難以接受較高的種子價格。而不結球白菜屬于異花授粉作物，有強烈的雜種優(yōu)勢，培育的新品種大多數(shù)是雜交一代品種，目前受制種方法的限制，種子價格較高。這樣就嚴重阻礙了不結球白菜雜交一代新品種的應用和推廣。需要研究在保證種子質(zhì)量的前提下成本較低的雜交制種方法。</p><p>　　3高品質(zhì)與抗熱性難以兼顧育種 </p>

25、<p>　　實踐表明，高品質(zhì)和抗熱性兩個性狀難以兼顧，目前用常規(guī)育種手段難以解決，應從分子育種上尋求突破。</p><p>　　4不結球白菜育種展望 </p><p>　　我國在不結球白菜晚抽薹育種、耐熱育種、耐寒育種、矮小型育種方面取得一定成績，今后應針對育種的難點和熱點進行深入研究，進一步豐富品種類型。細胞質(zhì)雄性不育研究已取得了較大進展，預計未來幾年內(nèi)，將應用于種子生產(chǎn)。

26、低亞硝酸鹽育種和抗病蟲育種研究，由于關系到人民身體健康，是不結球白菜育種研究的重點。隨著人民生活水平的提高，不但要求蔬菜的品質(zhì)優(yōu)、花色品種多，還要求低農(nóng)藥殘留、低硝酸鹽含量，對不結球白菜育種也提出了越來越高的要求。應加快新品種培育進程，滿足市場需求。</p><p><b>　　荷蘭百合育種現(xiàn)狀</b></p><p>　　1 育種技術成熟完善 </p>

27、<p>　　在百合種球生產(chǎn)中，荷蘭具備"天時、地利、人合"。荷蘭屬溫帶海洋性氣候，每年有750至800毫米的降雨量，土壤濕潤，適宜種球生長。同時，荷蘭健全的機構、完善的交通設施、豐富的人力資源也促進了種球行業(yè)的發(fā)展。荷蘭已有四百多年種球種植歷史，種球生產(chǎn)可以說是荷蘭的支柱產(chǎn)業(yè)之一。百合種球的培育通常要經(jīng)歷12至15年時間。具體程序為：第一年制定育種計劃；第二年在溫室中播種;第三年至第四年對種苗進行挑選；

28、第五年從選好的種苗上剝下鱗片進行克??；第六年栽培鱗片；第七年從鱗片上收獲籽球進行種植；第八年對篩選得到的克隆苗進行廣泛測試；第九年進行進一步測試，將好的克隆苗進行組培；第十年申請育種專利保護，對新品種進行名字注冊、推廣等；第十一年開始上市進行銷售或者賣給種球生產(chǎn)者；到了第十二年至十五年，就有足夠的種球可以銷售給花卉生產(chǎn)者。</p><p>　　2 種球生產(chǎn)不斷變化</p><p>　　百合

29、種球品種主要有東方雜交系百合、亞洲雜交系百合、鐵炮雜交系百合、喇叭雜交系百合等。近幾年，荷蘭育種專家又培育出以鐵炮雜交系百合與亞洲雜交系百合為親本的LA雜交系百合，以東方雜交系百合和亞洲雜交系百合為親本的OA雜交百合，以東方雜交系百合和喇叭雜交系百合為親本的OT雜交百合，以東方雜交系百合和鐵炮雜交系百合為親本的LO雜交百合，以亞洲雜交系百合和喇叭雜交系百合為親本的TA雜交百合。P.C.Schenk對百合品種的變化進行了總結：“上世紀80

30、年代以生產(chǎn)亞洲百合為主；到了90年代，主要生產(chǎn)東方百合；如今主要生產(chǎn)LA百合?！?lt;/p><p><b>　　參考文獻:</b></p><p>　　1榮敏,楊福合,章秀婷等.微衛(wèi)星DNA標記在家兔遺傳育種中的應用[J].特產(chǎn)研究,2008(1):67-70</p><p>　　2 陳晶,吉挺,殷玲等.微衛(wèi)星DNA技術在蜜蜂遺傳育種中的應用[J

31、].中國蜂業(yè),2007,58(11):8-10</p><p>　　3張自富,昝林森.微衛(wèi)星標記及其在家畜遺傳育種中的應用[J].中國牛業(yè)科學, 2006,32(4):35-37</p><p>　　4 陳明華.微衛(wèi)星標記及其在羊遺傳育種中的應用[J].四川草原, 2005(1):30-33</p><p>　　5 王卓偉,余茂德,魯成.AFLP分子標記技術在桑樹遺

32、傳育種研究中的應用前景[J]. 蠶業(yè)科學, 2000,26:6-8</p><p>　　6李萍.AFLP分子標記技術在蠶豆遺傳育種中的應用[J]. 湖北農(nóng)業(yè)科學, 2010, 49(1):201-203</p><p>　　7伍春蓮,喬愛民,王穎等.AFLP在蔬菜遺傳育種中的應用[J]. 長江蔬菜,2002：28-29</p><p>　　8朱珊,屈淑平,崔崇等.A

33、FLP標記在大白菜遺傳育種中的應用[J].中,國瓜菜,2007(3):24-26</p><p>　　9王強,陳沁濱,王瑋等.我國不結球白菜育種現(xiàn)狀及展望[J].中國種業(yè),2008(7):20-22</p><p>　　10李文才,張發(fā)軍,劉鐵山等.山東糯玉米育種現(xiàn)狀及其產(chǎn)業(yè)發(fā)展對策[J],2009(6):120-121</p><p>　　11張文銀,安永平,王彩