1、熱激蛋白(heat shock proteins,HSPs)是生物有機體(或離體細胞)在受到脅迫因子,如:高溫、低溫、干旱、ABA、重金屬等應激原的刺激后誘導合成或含量增加的一類應激蛋白質(zhì)。根據(jù)分子量的大小可分為:HSP100s、HSP90s、HSP70s、HSP60s、smHSPs(small HSPs)五大類。每類熱激蛋白都在植物體內(nèi)普遍存在,其中smHSPs是最為常見的一類,它能被高溫、低溫、高鹽、干旱、激素以及機械損傷等多種脅迫

2、因子誘導,同時也能受到種子的萌發(fā)過程、花藥發(fā)育過程及果實的成熟過程等調(diào)控。smHSPs主要是充當著分子伴侶的功能,它不依賴ATP就能阻止變性蛋白的積累、保護蛋白的折疊,在植物抵抗并適應脅迫環(huán)境與生長發(fā)育的方面起著重要作用。
　　 蠟梅素有耐寒、耐旱和耐剪的“三耐”與凍不壞、旱不死和不缺枝“三不”的美譽。HSPs作為重要的逆境響應蛋白,在蠟梅高效逆境防御機制中扮演怎樣的角色、發(fā)揮什么作用是一個值得探討的問題。我們的研究團隊克隆了蠟

3、梅熱激蛋白基因CpHSP1,發(fā)現(xiàn)其表達具有較強的脅迫響應特征和組織特異性。為了進一步探索CpHSP1基因參與蠟梅逆境響應和發(fā)育過程的機理,本論文運用hiTAIL-PCR技術(shù)從蠟梅基因組DNA中獲得CpHSP1基因的啟動子,并對該啟動子的功能進行初步分析。主要取得了以下實驗結(jié)果:
　　 1.蠟梅CpHSP1基因啟動子克隆
　　 在已獲得蠟梅熱激蛋白CpHSP1基因序列的基礎上,利用hiTAlL-PCR技術(shù)對蠟梅CpHSP1

4、基因上游未知啟動子序列進行了擴增,最終獲得954bp的啟動子片段。
　　 2.蠟梅CpHSP1基因啟動子元件分析
　　 運用PlantCar在線分析軟件對該啟動子序列進行分析,該啟動子具有TATA-box和CAAT-box等基本轉(zhuǎn)錄元件,以及與脫落酸(ABA)應答有關(guān)的ABRE元件、與光和厭氧生活及ABA的應答相關(guān)的G-BOX元件、熱應答元件HSE、與干旱相關(guān)MBS元件、激活特定分生組織的順式作用元件OCT、與花特異表達

5、有關(guān)的元件G-BOX以及胚乳表達必須的順式調(diào)控元件Skn-1_motif。此外,該啟動子還具有光效應元件CATT-motif、晝夜節(jié)律順式調(diào)控有關(guān)的順式調(diào)控元件circadian等元件。
　　 3.植物表達載體構(gòu)建
　　 利用酶切、連接等技術(shù)手段將CpHSP1基因啟動子替換表達載體pCAMBIA-1300-221中的CaMV35S組成型啟動子序列,與GUS報告基因連接,通過PCR和雙酶切驗證說明植物表達載體pCAMBIA