1、目的：綿羊主要組織相容性復(fù)合體（MHC）是與綿羊各種抗原遞呈、免疫調(diào)節(jié)、抗性/易感性等緊密相關(guān)的基因簇，這些基因是一組緊密連鎖的基因群。目前我們對(duì)綿羊MHC的基因組結(jié)構(gòu)信息知之甚少。開展綿羊基因組MHC區(qū)段基因結(jié)構(gòu)與組成的研究旨在尋找并研究與重要經(jīng)濟(jì)性狀緊密相關(guān)的基因以及與綿羊?qū)膊〉目剐曰蛞赘行韵嚓P(guān)的基因，并用于指導(dǎo)遺傳育種。本研究的目標(biāo)是利用本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的中國(guó)美利奴綿羊細(xì)菌人工染色體（BAC）文庫和高密度物理圖譜，篩選出中國(guó)美利奴細(xì)

2、毛羊MHCclassII區(qū)222G18BAC克隆內(nèi)的表達(dá)基因，分析綿羊222G18 BAC克隆的基因結(jié)構(gòu)。同時(shí)，對(duì)綿羊MHC區(qū)段已知基因進(jìn)行克隆與原核表達(dá)，為相應(yīng)基因功能的研究奠定基礎(chǔ)。
　　方法：對(duì)MHC區(qū)段陽性克隆222G18，用BsaJⅠ酶切后制備α-32P放射性探針，通過噬菌斑原位雜交技術(shù)篩選中國(guó)美利奴綿羊五種組織cDNA混合文庫，篩選出該BAC克隆插入片段中可表達(dá)基因。同時(shí)，利用GenBank數(shù)據(jù)庫中已有的綿羊、牛MHC

3、基因的EST序列以及雜交篩選獲得的序列，進(jìn)行序列分析。對(duì)部分MHC全序列基因設(shè)計(jì)特異性引物，PCR克隆并進(jìn)行原核表達(dá)，并對(duì)表達(dá)出的蛋白質(zhì)進(jìn)行初步分析。
　　結(jié)果：經(jīng)過兩輪雜交篩選，獲得12個(gè)cDNA陽性克隆，經(jīng)測(cè)序、比對(duì)等生物信息學(xué)分析確定獲得7條與免疫相關(guān)的序列，其中3條具有完整的編碼序列。利用SIM4軟件將7條序列定位到BAC克隆上，結(jié)果顯示綿羊MHC區(qū)段的表達(dá)序列多為斷裂基因且跨度很大。同時(shí)，對(duì)綿羊MHC的MHCI、DRA、

4、DRB1、DQB1、DQA1和DQA2這6個(gè)已知基因進(jìn)行了特異PCR克隆。對(duì)DQA1和DRB1進(jìn)行原核表達(dá)，表達(dá)的蛋白質(zhì)大小分別為28KDa和30KDa。
　　結(jié)論：綿羊MHC區(qū)段BAC陽性克隆222G18的雜交篩選共得到7個(gè)基因，其中3個(gè)具有完整編碼序列，分別編碼綿羊MHC區(qū)段DRA、DRB1和BTNL2基因的完整序列?；駾RA與綿羊細(xì)菌性腐蹄病相關(guān)，基因DRB1與綿羊胃腸道線蟲病和淋巴瘤相關(guān)，基因BTNL2與結(jié)節(jié)病和包涵體皮