1、該研究在SLT-ⅡeB亞單位基因克隆、定序及在菌細胞內(nèi)表達的基礎上,利用菌體表面表達抗原技術,構建大腸桿菌表面表達SLT-ⅡeB的重組菌,旨在對其作為黏膜疫苗而激發(fā)的黏膜免疫反應進行初步的研究.通過在不同溫度、不同培養(yǎng)時間及IPTG誘導條件下重組菌PZBSPAX融合蛋白表達的檢測,利用免疫熒光抗體技術及免疫膠體金技術,證明重組大腸桿菌PZBSPAX可表面表達PP-SLT-ⅡeB-SPAX融合蛋白;利用SDS-PAGE、Western-b

2、lotting對重組大腸桿菌PZBSPAX的表達產(chǎn)物進行分析,結果表明該重組菌表達的融合蛋白PP-SLT-ⅡeB-SPAX與預期的大小一致,且具有SLT-ⅡeB的抗原性.用重組菌PZBSPAX口服免疫1日齡和15日齡仔豬,通過對免疫后1d、3d、7d、10d、15d、30d的糞檢菌的抗氨芐青霉素試驗及對其進行質(zhì)粒酶切分析,顯示該重組菌能穩(wěn)定地定居于仔豬腸道至少30天(至實驗結束時);利用間接ELISA方法對免疫后10d、15d、30d仔

3、豬腸黏液特異性SIgA及血清特異性IgA、IgG進行了檢測,并對其OD值與非免疫對照組及與由載體菌(HB101大腸桿菌)包被酶標板后檢測的OD值進行了比較分析,結果顯示了重組菌PZBSPAX經(jīng)仔豬口服后能產(chǎn)生較高水平的腸黏液特異性SIgA和血清特異性IgA、IgG,提示該重組菌作為口服疫苗可激發(fā)仔豬腸黏膜免疫反應,同時也可引起全身性體液免疫反應.該研究成功地構建了革蘭氏陰性菌(HB101)的表面表達載體系統(tǒng),并成功地將仔豬水腫病毒素保護