1、為闡明PsPⅡ基因的生物學功能和深入理解低溫解除植物花芽休眠的分子機制，本實驗選用山東菏澤牡丹基地4年生牡丹品種‘魯荷紅’(Paeonia suffruticosa Andr.‘Lu HeHong’)的健壯植株，在不同低溫處理下研究PsPⅡ基因的表達變化及植株的生理生化變化。主要實驗結果如下:
　　 1.形態(tài)觀察結果表明，感受低溫0d的牡丹，花芽不會發(fā)生萌動;說明低溫是使牡丹花芽萌動的必要條件。感受恒低溫15d，牡丹‘魯荷紅’休

2、眠基本解除;感受恒低溫天數23d，休眠徹底解除;說明感受恒低溫的牡丹‘魯荷紅’花芽休眠解除的底限為15d，15-23d牡丹休眠徹底解除。
　　 2.5'-RACE PCR擴增，得到439bp的5'-末端片段，拼接得到899bp的PsPⅡ全長cDNA。其中，5'非編碼區(qū)(UTR)為70 bp，3'UTR為226bp，包括24個堿基的poly(A)尾，并含有一個完整的ORF為603bp，編碼200個氨基酸。該序列在GenBank獲得

3、的登錄號為HQ699900。
　　 3.對PsPⅡ全長cDNA進行生物信息學分析，預測牡丹PⅡ蛋白是一種親水性的非分泌型蛋白，可能定位于胞質中，PsPⅡ主要的二級結構是α-螺旋。預測其編碼的蛋白質可能是一種花芽胞內C/N水平的感應蛋白，而且與谷氨酰胺合成酶的功能密切相關。同源性分析得出，與牡丹PⅡ蛋白同源性最高的是水稻的PⅡ類蛋白，同源性達83.62％，與牡丹PⅡ蛋白位于系統(tǒng)進化樹的同一分枝。接下來依次與牡丹PⅡ氨基酸序列同源性

4、較高的為煙草、擬南芥和松樹。
　　 4.熒光定量PCR技術檢測結果顯示，隨著感受低溫天數的增加，在整個牡丹內休眠解除的進程中，PsPⅡ基因的表達量不斷增加，當低溫15d時，該基因的表達量達到最高。northern檢測無信號。
　　 5.對不同處理的牡丹花芽分別進行碳水化合物、淀粉、可溶性蛋白、游離氨基酸4個生理指標的測定，并將其換算成C/N水平。結果表明胞內C/N水平變化趨勢和可溶性碳水化合物含量與五個低溫處理的PsPⅡ

5、基因在RNA水平上的變化趨勢基本吻合;顯著性分析可知，當感受低溫15d時，α=0.05水平下，C/N與可溶性碳水化合物含量極顯著。測定五個低溫處理水平下的谷氨酰胺合成酶活性的變化，其趨勢與PsPⅡ基因表達量的變化也相一致;先升高很快，后升高較慢，在低溫15d時，達到最高點。相關系數分析可知，PsPⅡ基因表達量與GS活性的相關程度最高，為0.6813;可溶性碳水化合物含量次之，其次是C/N比，相關系數分別為0.6538和0.5937，三者