1、T w o —D i m e n s i o n a l G e l E l e c t r o p h o r e s i sA n a l y s i so f P r o t e i n sA s s o c i a t e dw i t ht h eR e l e a s eo f D o r m a n t B u d s i nT r e eP e o n y( P a e o n i as u f f r u t i c

2、o s a ) a n dI d e n t i f i c a t i o nb y M A L D I - T O F ／T O F M ST h e s i ss u b m i t t e d t oO j n g d a o A g r i c u l t u r a l U n i v e r s i t yI n F u l f i l l m e n to f t h e R e q u i r e m e n tf o

3、 r t h eD e g r e e o f —M a s t e r o f S c i e n c eT i a n X i a o l i l a o l i( D e p a r t m e n t o f L i f eS c i e n c e )S u p e r v i s o r ：Z h e n g G u o s h e n gQ i n g d a o ．C h i n aJ u n e ，2 0 1 2青島農(nóng)

4、業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文 摘要摘要為深入理解低溫解除植物花芽休H 民的分子機(jī)制，利用雙向電泳技術(shù)篩選了牡丹休眠中的差異蛋白，為期牡丹花芽?jī)?nèi)休眠解除機(jī)理提供新的資料。本實(shí)驗(yàn)選用山東菏澤牡丹基地4 年生牡丹品種‘魯荷紅’( P a e o n i a s u f f r u t i c o s aA n 出‘L uH e H o n g ’) 的健壯植株，在不同低溫處理下研究其蛋白的表達(dá)變化及植株的生理生化變化。主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：l 、篩選了牡丹

5、花芽組織蛋白提取方法本研究以魯菏紅花芽為實(shí)驗(yàn)材料，采用了T C A ／丙酮法，T r i s 。飽和酚法及醋酸銨甲醇法提取牡丹花芽全蛋白。其中，T C A ／丙酮法操作簡(jiǎn)單，蛋白提取效率高，是牡丹花芽蛋白提取的高效方法。2 、建立適用于牡丹花芽蛋白質(zhì)組分析的雙向電泳樣品制備技術(shù)采用1 8c m ，p H 4 ．7 的I P G 膠條，蛋白上樣量為2 0 0P ．g ，上樣體積為3 4 0 灶，被動(dòng)水化時(shí)間1 6h 。I E F 程序?yàn)椋?/p>

6、1 0 0 V 1 h l 5 0 0V 1h ；1 0 0 0 V 1 h l 8 0 0 0 V 3 h l 8 0 0 0 V 6 h l5 0 0 V 任意。S D S ．P A G E 的電泳條件為1 W 1 h ，4W 1 5h 。染色方法為銀染。3 、雙向電泳結(jié)果篩選了2 0 個(gè)豐度較高的蛋白點(diǎn)進(jìn)行了質(zhì)譜鑒定應(yīng)用I m a g e M a s t e r 2 D p l a t i n u m 軟件分析，對(duì)不同時(shí)期牡丹花芽

7、的雙向電泳圖進(jìn)行分析，選擇差異大于1 ．5 倍的點(diǎn)為顯著差異點(diǎn)，共識(shí)別3 1 個(gè)差異蛋白。從3 1 個(gè)差異蛋白中選擇了2 0 個(gè)豐度較高的蛋白點(diǎn)進(jìn)行了質(zhì)譜鑒定。4 、利用質(zhì)譜鑒定技術(shù)，鑒定所篩選的差異蛋白將不同時(shí)期牡丹花芽蛋白質(zhì)表達(dá)量差異倍數(shù)在3 ．O 以上的2 0 個(gè)蛋白差異點(diǎn)進(jìn)行M A L D I ．T O F ．T O F ．M S 初步鑒定和數(shù)據(jù)庫檢索，并對(duì)鑒定蛋白進(jìn)行功能預(yù)測(cè)及分析，其中1 2 個(gè)蛋白質(zhì)譜信號(hào)較好，在數(shù)據(jù)庫搜索