1、石斛屬植物是蘭科的附生植物，它是我國傳統(tǒng)的名貴中藥，除了具有優(yōu)良的藥用價值之外，它還具有較高的觀賞價值。干旱是影響植物正常代謝和生長發(fā)育最主要非生物脅迫因子之一。本文就這一問題采用國際上通用的蛋白質組學研究手段，通過雙向電泳及質譜技術分析探究石斛抗旱逆境生理與所變化的蛋白之間的關系，為從分子水平揭示石斛抗旱機制奠定基礎。同時也對雙向電泳體系進行了優(yōu)化。
　　主要研究結果如下：
　　1本文通過比較和分析不同提取蛋白質的方法，延

2、長等電聚焦電泳(IEF)時低電壓的持續(xù)時間除鹽促進上樣，比較不同的凝膠濃度和上樣量對結果的影響，比較和改進考馬斯亮藍和銀染染色的方法，成功地建立了石斛葉片蛋白質雙向電泳技術，其蛋白質樣品制備質量好，電泳分辨率高，為更進一步的蛋白質組學研究奠定了基礎。
　　2用優(yōu)化的雙向電泳技術對組織培養(yǎng)的石斛全蛋白進行了分離，并且對經過組織培養(yǎng)后用10％、20%、30%PEG模擬干旱脅迫處理的石斛葉片的全蛋白進行了分離，應用ImageMaster

3、5.0軟件分析了雙向電泳圖譜，發(fā)現(xiàn)經過水培(對照)、10%、20%、30%PGE處理的石斛葉片的全蛋白組，可以分離到653，662，673，590個蛋白質點，這些蛋白質在分子質量12-97.4 kDa的范圍內都有分布，等電點集中在pH4-7范圍內。在干旱和對照處理的石斛葉片的蛋白質組分中檢測到23個與對照不同的差異蛋白質點。其中表達上調的有16個，表達下調的有7個。
　　3從經過干旱處理的材料的蛋白質組分中挑選出表達豐度高、與對照

4、明顯有差異的蛋白質點，進行了膠內酶切和質譜鑒定（MALDI-MS），獲得了部分肽段氨基酸序列，并進一步通過肽指紋圖譜（PMF）數(shù)據(jù)庫檢索，獲得了11個蛋白質的全氨基酸序列。
　　4利用NCBI database，Swissprot，BLAST，Mascot等生物信息學方法，對蛋白質性質進行了分析研究，表明其中有意義的蛋白質點一個為泛素蛋白（ubiquitin，Ub），該蛋白與干旱誘導產生的水解相關。另一個是在逆境下與抗氰交替呼吸作

5、用有關的蛋白（alternative respiratory pathway oxidase）。還有一個則是在環(huán)境脅迫下對Calnexin基因的表達起作用的鉬輔助因子。以及其他與干旱作用相關的硫氧還蛋白（thioredoxin family protein）、離子轉運協(xié)同蛋白(Na+/K+/Cl-cotransport protein）和二羥基黃酮醇還原酶(dihyroflavonol4-reductase）。
　　本實驗有助于研