1、每年，農(nóng)業(yè)蟲害在全球范圍內(nèi)對農(nóng)作物造成的損害，是農(nóng)作物減產(chǎn)的最主要因素之一。由于蘇云金芽胞桿菌(Bacillus thuringensis)對大多數(shù)農(nóng)業(yè)害蟲都具有特異的殺蟲活性，并且，對人畜安全，不污染環(huán)境。目前，已成為世界上產(chǎn)量最多、應(yīng)用最廣泛的微生物殺蟲劑。特別是，隨著植物基因工程的發(fā)展，利用轉(zhuǎn)基因植物來防治害蟲已經(jīng)進(jìn)入到實際運用階段，其中，在抗蟲轉(zhuǎn)基因植物方面，Bt殺蟲基因得到了最為普遍的應(yīng)用。 本研究在克隆新的cry基因

2、的基礎(chǔ)上，用Cry2Ab、Cry2Aa、Cry1Ca、Vip3Da或Vip3Af殺蟲蛋白對水稻二化螟、大螟的殺蟲活性進(jìn)行了生物活性分析;改良了培養(yǎng)Bt菌株的傳統(tǒng)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。 1．本文從實驗室自行分離的C006菌株中，經(jīng)PCR擴增鑒定、酶切分析和構(gòu)建質(zhì)粒DNA文庫的方法，獲得了含有10kb陽性片段轉(zhuǎn)化子，對其進(jìn)行亞克隆，經(jīng)測序分析發(fā)現(xiàn)該片段含有2種cry基因，其中一個是新的cry1類基因，與已知的cry1類基因的同源性低于

3、80％，并在GeneBank中登記，序列注冊號為EF550989。另一個基因核苷酸序列與crylAb13一致。 2．將cry1Gb2全長基因分別插入Bt和E. coli表達(dá)載體，在大腸桿菌BL21和蘇云金芽胞桿菌HD73<'->中分別表達(dá)出133kDa的Cry蛋白，并且在Bt無晶體突變株中能形成典型的雙錐體型晶體。這種新蛋白對小菜蛾進(jìn)行生物活性測定，具有很強的毒力，LC<,50>為7.48 μg/mL。 3．針對水稻重要

4、鱗翅目害蟲二化螟和大螟，從本組已有的基因中選用15種，分別進(jìn)行單一蛋白殺蟲活性篩選，結(jié)果表明對水稻二化螟幼蟲具有活性的Cry2Aa、Cry2Ab、Vip3Da蛋白，它們的致死中濃度LC<,50>分別為：27.59、13.88和10.29 μg/g；毒蛋白組合Cry1Ab與Cry2Aa、Cry1Ab與Cry2Ab、Cry1Ab與Vip3Da、Cry1Ca與Cry2Aa、Cry1Ca與Cry2Ab、Cry1Ca與Vip3Da對二化螟LC<,

5、50>分別為：0.39、0.43、0.15、0.79、0.64和3.39 μg/g，不同毒蛋白的協(xié)同增效作用顯著。 4．對夜蛾科害蟲大螟的殺蟲結(jié)果表明：Cry1Ca對水稻大螟具有較顯著的活性，Cry1Ca對水稻大螟的LC<,50>為4.28μg/g，Vip3Aa為16.64μg/g，Vip3Af為57.S4μg/g，Vip3Da為13.93μg/g。 5．對幾種不同的Bt培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化，獲得了最佳的配方：含有50mMTr