豬附紅細胞體病的診斷及其病原體的免疫原性分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、豬附紅細胞體(Mycoplasma suis,M.suis)是一種寄生于豬血液中的一種微生物,能夠引起豬的發(fā)熱、貧血、黃疸等癥狀的血液感染性疾病。長期以來,由于該病多呈隱性感染,發(fā)病率較低,未引起人們的足夠重視。目前,豬附紅細胞體病在全國范圍內(nèi)呈大面積爆發(fā)和流行,對我國的養(yǎng)殖業(yè)造成了重大的經(jīng)濟損失。但是,我們對于該病的診斷治療和預防仍然沒有較為有效的方法。同時國內(nèi)外對豬的研究相對較少,有關(guān)形態(tài)學特性、分類地位、診斷準確性、有效預防等問題

2、都有待進一步研究。所以為了有效的控制該病的發(fā)生,我們必須對該病原進行深入的研究。本文采用在泰安地區(qū)豬場搜集的疑似病例進行以下三個方面的研究:
   ⑴觀察發(fā)病豬的臨床癥狀,主要表現(xiàn)為:發(fā)熱、黃疸、呼吸急促、尿液濃黃,耳尖、四肢末端皮膚發(fā)紫;其病理學表現(xiàn)為:肺出血、水腫,肝臟、脾臟、淋巴結(jié)腫大,胃粘膜明顯出血、潰瘍。然后,對血液樣本進行血涂片、吉姆薩染色和瑞氏染色。顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn),發(fā)現(xiàn)紅細胞呈多形性,吉姆薩染色,M.suis 被染

3、成淡紫色;瑞氏染色,被染成紫色。并且,無菌采集血液并提取DNA模板;利用16SrRNA的一對通用引物,對豬附紅細胞體基因組DNA進行PCR鑒定,擴增出1400bp的特異性片段,與預期結(jié)果一致。該方法特異、靈敏、快熟,可從分子水平上對附紅細胞體進行診斷。
   ⑵無菌法采取自然發(fā)病的豬附紅細胞體病的血液,從血液中分離M.suis,然后提取其基因組DNA。利用能擴增多種動物血營養(yǎng)菌部分16SrRNA基因的通用引物進行PCR擴增,結(jié)果

4、擴增出大小約為1400bp的DNA片段。對PCR產(chǎn)物進行測序并作系統(tǒng)進化樹,結(jié)果與美國基因庫中的Illinois株同源性達97%以上。
   ⑶從自然感染的豬血液中純化豬附紅細胞體,應用SDS-PAGE和免疫印跡試驗對豬附紅細胞體抗原蛋白組分進行初步分析。通過SDS-PAGE分離得到主要有13種蛋白質(zhì),其蛋白分子量范圍為15Kd-170kD,分別是120kD,112kD,110kD,108 kD,68.2 kD,58.9kD,4

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