1、大白菜(Brassica campestris ssp.pekinensis)原產我國,其栽培面積及產量均居我國蔬菜之首。霜霉病是大白菜三大病害之一,嚴重影響大白菜的產量和品質,因此,抗霜霉病育種一直是大白菜的重要育種目標。隨著分子生物學技術的發(fā)展,克隆并利用植物的抗性基因,研究這些基因的結構和功能已成為生物技術領域的熱點。本研究以大白菜自交系‘85-1’的BAC文庫為材料,應用同源序列法篩選抗病同源基因的BAC克隆,對獲得的10個陽性

2、克隆進行酶切分析,構建了亞克隆文庫,并對篩選的陽性亞克隆進行了測序分析。本試驗的研究結果如下:
　　 1.根據植物抗霜霉病基因保守區(qū)設計簡并引物,利用三步PCR方法對大白菜‘85-1’BAC文庫進行篩選,從19200個BAC克隆中篩選到含有目的基因的10個陽性克隆。對10個陽性克隆進行NotⅠ酶切,經脈沖場電泳檢測,10個克隆的插入片段在80-100kb之間。將10個陽性克隆分別用EcoRⅠ、BamHⅠ及HindⅡ酶切,電泳檢測

3、酶切結果,由酶切圖譜顯示,選擇陽性克隆94-G-17和限制性內切酶HindⅡ建立亞克隆文庫。
　　 2.含抗霜霉病同源基因的亞克隆文庫含有6200個克隆,覆蓋BAC克隆的180倍左右。隨機挑取85個亞克隆進行EcoRⅠ,PstⅠ雙酶切,經瓊脂糖凝膠電泳檢測,其中78個克隆酶切后均有插入片段,其大小基本分布在1-5kb之間,平均插入片段大小為3kp左右。7個克隆酶切后只有載體片段,無插入片段,空載率為8.36％。
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