1、本論文選用白肋型煙草品種Burley21和正常綠色型馬里蘭煙品種Maryland609為供試材料，在分析了白肋型煙草葉色性狀遺傳特點的基礎(chǔ)上，對Burley21和Maryland609生長發(fā)育過程中葉片質(zhì)體色素含量的差異及其可能機理進行了探討，以期為白肋型煙草葉色性狀、香氣品質(zhì)及高等植物葉色突變研究提供參考依據(jù)。論文研究的主要內(nèi)容及所得結(jié)果如下：
　　 1、通過大田常規(guī)遺傳群體的構(gòu)建，分析了白肋型煙草葉色性狀的遺傳特點。結(jié)果發(fā)現(xiàn)

2、，Burley21和Maryland609兩類煙草品種的正交與反交F1代植株，全部表現(xiàn)為正常綠色型，而在其BC1代和F2代群體中，既有正常綠色型植株，也有白肋型植株。統(tǒng)計分析表明，雜交F2代群體中正常綠色犁和白肋型分離比例為12.5:1，BC1代群體的分離比例為4.9:1?？ㄆ椒綑z驗分析表明，兩類煙草品種間的F2代和BC1代的分離比例符合雙隱性性狀遺傳規(guī)律。從而進一步驗證了白肋型煙草葉色的黃綠色性狀遺傳為兩對隱性重疊基因控制的細胞核遺傳

3、。
　　 2、生育期的連續(xù)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，Burley21植株主莖與葉片主脈呈乳白色的性狀表現(xiàn)，從苗床期就明顯顯現(xiàn)，且在整個生長發(fā)育過程中均穩(wěn)定保持該性狀表現(xiàn)；但葉色黃綠的表型性狀，則是從旺長期開始明顯顯現(xiàn)，而在苗期和旺長期之前，與Maryland609之間并無明顯差異。
　　 3、采用分光光度法測定比較了Burley21和Maryland609植株生長發(fā)育的假植期、團棵期、旺長期、現(xiàn)蕾期和成熟期中部葉片中質(zhì)體色素的含量。結(jié)果

4、表明，Burley21在生長前期，葉脈中的葉綠素含量均顯著低于Maryland609，但類胡蘿卜素含量差異在上述五個發(fā)育階段均不明顯。生長前期，二者葉肉組織中的葉綠素和類胡蘿卜素含量在同一發(fā)育時期均無明顯差異。從旺長期開始，Burley21葉肉組織中的葉綠素含量明顯低于Maryland609，二者在同一發(fā)育時期的差異性達到極顯著水平。成熟期，這種差異達到最大值，Maryland609葉綠素含量為Burley21中的3.35倍。旺長期之后

5、，Burley21葉肉組織中的類胡蘿卜素含量也明顯低于Maryland609，但差異幅度明顯少于葉綠素。
　　 4、測定比較了Burley21和Maryland609旺長期植株葉片中影響葉綠素合成的7種主要前體物含量。結(jié)果表明，兩種煙草品種旺長期植株葉片中葉綠素合成前體物δ-氨基乙酰丙酸(ALA)、膽色素原(PBG)、尿卟啉原Ⅲ(UrogenⅢ)、糞卟啉Ⅲ(CoprogenⅢ)的含量并沒有明顯差異，但Burley21葉片中原卟啉

6、Ⅸ(ProtoⅨ)、鎂原卟啉Ⅸ(Mg-ProtoⅨ)和原葉綠素酸酯(Pchlide)的含量明顯低于Maryland609中。這說明Burley21葉片中葉綠素合成在這幾步受阻，從而導(dǎo)致葉綠素含量降低，葉片呈現(xiàn)黃綠色。據(jù)此推斷，白肋型煙草葉色突變的分子機制，可能與葉綠素生物合成途徑中的基因突變有關(guān)。
　　 5、葉綠素酶是植物體葉綠素降解的關(guān)鍵限速酶。實驗采用分光光度法，測定了旺長期Burley21和Maryland609植株葉片葉

7、綠素酶活性，并采用實時定量PCR技術(shù)對這兩類煙草品種旺長期葉片葉綠素酶基因的表達水平進行了檢測比較。酶活性測定結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Burley21和Maryland609葉片中葉綠索酶活性分別為525.17nmol g-1h-1和257.60nmolg-1h-1，前者為后者的2.04.倍。實時定量PCR檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Burley21葉片中葉綠素酶基因表達量為Maryland609中的3.01倍。這一結(jié)果表明，旺長期Burley21葉片的黃綠色性狀

8、顯現(xiàn)與葉片葉綠素酶活性升高及其基因表達增強有關(guān)。由此推斷，葉綠素酶基因表達增強及酶活性升高的協(xié)同作用，可能加速了葉綠素的降解，進而對白肋型煙草葉片的黃綠色表型性狀的顯現(xiàn)起到了促進作用。
　　 6、采用Southern雜交技術(shù)，對Burley21和Maryland609葉綠素酶基因的拷貝數(shù)進行了檢測。雜交結(jié)果表明，這兩類煙草中葉綠素酶基因均以單拷貝形式存在。
　　 7、采用氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)，對Burley21和Maryland