土壤放線菌的分離、鑒定及其活性化合物的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、放線菌由于其產(chǎn)生抗生素、酶及其抑制劑等有用生物活性物質(zhì),具有巨大經(jīng)濟(jì)價值,至今發(fā)現(xiàn)的兩萬種生物活性物質(zhì)中,約70%是由放線菌產(chǎn)生的。而土壤又是放線菌含量最豐富的地方,因此開發(fā)土壤放線菌具有十分重要的意義。為了從土壤中分離出放線菌;以及從這些菌株的發(fā)酵物中分離出新的微生物農(nóng)藥。本研究采用了選擇性培養(yǎng)基結(jié)合三重抗生素抗性篩選法對土壤放線菌進(jìn)行篩選,對篩選的菌株進(jìn)行了其活性化合物的研究,具體研究內(nèi)容如下:
   (1)放線菌的分離。對

2、來自四川省達(dá)州市、湖北省武漢市、山東省臨沂市、遼寧省海城市、黑龍江省哈爾濱市等五個地區(qū)的土樣進(jìn)行自然干燥等預(yù)處理后,采用選擇性分離培養(yǎng)基腐殖酸培養(yǎng)基加20μg/mL的萘啶酮酸進(jìn)行放線菌的選擇性分離。共分離得到54株放線菌。
   (2)高活性菌株的篩選。采用鏈霉素(Streptomycin)、慶大霉素(Gentamicin)及利福平(Rifampicin)三重抗生素抗性篩選法對所得到的放線菌進(jìn)行進(jìn)一步篩選。最終得到4株活性很高的

3、放線菌,其分別是10號、49號、50號和52號放線菌,并對其進(jìn)行了進(jìn)一步研究。
   (3)發(fā)酵粗提物對細(xì)菌和真菌的抑制研究。將4株放線菌的發(fā)酵粗提物,進(jìn)行了對2種細(xì)菌及9種致病真菌的抑菌活性研究,結(jié)果表明,其發(fā)酵粗提物對細(xì)菌的抑菌圈均達(dá)到20mm以上,對9種真菌也表現(xiàn)出了不同程度的抑制活性,有的甚至達(dá)到了95%以上。
   (4)發(fā)酵粗提物的除草活性研究。將這4株放線菌的發(fā)酵粗提物進(jìn)行了2種除草劑靶標(biāo)酶的篩選和除草活性

4、的測定。結(jié)果顯示10號菌株的發(fā)酵粗提物能抑制天冬酰胺合成酶,同時對稗草和苘麻均有很強(qiáng)的抑制作用。
   (5)發(fā)酵粗提物的溫度穩(wěn)定性研究。經(jīng)過對這4株放線菌的發(fā)酵粗提物的熱穩(wěn)定性研究,得出的結(jié)果是10號、50號和52號放線菌的發(fā)酵粗提物對溫度的穩(wěn)定性較好,當(dāng)溫度達(dá)到90℃時,還具有很強(qiáng)的抑菌活性;49號菌株的發(fā)酵粗提物對溫度的穩(wěn)定性較弱,當(dāng)溫度達(dá)到30℃,其抑菌活性就完全喪失了。
   (6)放線菌的分類學(xué)研究。結(jié)合經(jīng)典

5、分類和分子生物學(xué)中16SrDNA分類,對這4株放線菌的分類研究表明:其形態(tài)特征、培養(yǎng)特征、生理生化特征均與鏈霉菌屬一致:其其中10號放線菌同鏈霉菌Streptomyceslavendulae的相似性達(dá)到99%;49號放線菌同鏈霉菌Streptomycesviolaceolatus的相似性達(dá)到99%;50號放線菌同鏈霉菌Streptomycesolivaceus的相似性達(dá)到99%;52號放線菌同鏈霉菌Streptomycespactums

6、train173848的相似性達(dá)到100%。進(jìn)一步確定這4株放線菌均屬于鏈霉菌屬(Streptomyces)。
   (7)發(fā)酵粗提物的分離。將這4株放線菌的發(fā)酵粗提物進(jìn)行了分離、純化及結(jié)構(gòu)鑒定。結(jié)果顯示,其中從10號菌株中分離出了6種化合物;49號菌株中分離出了化合物fogacin,50號菌株中分離出了具有抗癌、抑菌、除草等多種用途的活性化合物borrelidin,從52號菌株中分離出了2種化合物。
   (8)化合物

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