1、以雜交水稻耐鹽型汕優(yōu)10號(hào)和鹽敏感型兩優(yōu)培九為實(shí)驗(yàn)材料,通過(guò)雙向聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)(2-DE)以及基質(zhì)輔助激光解吸附離子化時(shí)間飛行質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS/MS)技術(shù),分別對(duì)早期幼苗(10d苗齡)和三葉期(18d苗齡)幼苗在正常和鹽脅迫條件(100mM NaCl)下鹽脅迫響應(yīng)蛋白質(zhì)組進(jìn)行分析、鑒定,得到如下研究結(jié)果:
　　 1.將兩種水稻分別播于含清水(對(duì)照)和100mM NaCl的發(fā)芽盒中,10d后分別取地上部和根,

2、利用TCA-丙酮沉淀法提取總蛋白。采用17cm線性pH4-7IPG膠條分離地上部和根的總蛋白,經(jīng)PDQuest軟件分析,匹配率均達(dá)90％以上。在葉片中,與對(duì)照相比,鹽處理后汕優(yōu)10號(hào)有25個(gè)點(diǎn)明顯上調(diào),兩優(yōu)培九中40個(gè)點(diǎn)上調(diào)表達(dá),其中15個(gè)點(diǎn)在汕優(yōu)10號(hào)和兩優(yōu)培九中均上調(diào)表達(dá)且差異明顯。選取其中6個(gè)點(diǎn)進(jìn)行MALDI-TOF-MS/MS質(zhì)譜分析,鑒定出2種蛋白質(zhì),分別為磷酸丙酮酸水合酶和核酮糖1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶。在根中,與對(duì)照相

3、比,鹽處理后汕優(yōu)10號(hào)中有96個(gè)點(diǎn)上調(diào),73個(gè)點(diǎn)下調(diào),兩優(yōu)培九中有68個(gè)上調(diào)點(diǎn),85個(gè)下調(diào)點(diǎn)。選擇其中11個(gè)蛋白點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜鑒定,結(jié)果共鑒定出8種蛋白質(zhì),包括病程相關(guān)的類甜蛋白、推測(cè)的類玉米素、推測(cè)的球蛋白2S、幾丁質(zhì)酶、糖苷水解酶、乙二醛酶、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶、抗壞血酸過(guò)氧化物酶。這些蛋白質(zhì)主要參與碳水化合物和能量代謝的調(diào)節(jié),病程調(diào)控、有毒物質(zhì)的清除、抵抗病菌侵染類蛋白、蛋白質(zhì)的合成與定位等。
　　 2.在水培條件下用100mM

4、 NaCl對(duì)18d苗齡的水稻幼苗處理,一周后取地上部,利用TCA-丙酮沉淀法提取地上部總蛋白質(zhì),通過(guò)17cm線性pH3-10和pH5-8兩個(gè)不同區(qū)段IPG膠條分離地上部總蛋白。結(jié)果表明兩種水稻的2-DE蛋白表達(dá)譜均具有較好的重復(fù)性。經(jīng)PDQuest軟件分析,匹配率均達(dá)90％以上,與對(duì)照相比,在pH3-10區(qū)段中,汕優(yōu)10號(hào)中上調(diào)2倍以上的點(diǎn)有6個(gè),兩優(yōu)培九中有15個(gè),選取其中9個(gè)重復(fù)性好且差異明顯蛋白點(diǎn)進(jìn)行MALDI-TOF-MS/MS

5、分析,鑒定得到3種蛋白質(zhì),分別為核酮糖1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶、小分子伴侶GroEL以及磷酸丙糖異構(gòu)酶。而在pH5-8區(qū)段中,鹽處理后汕優(yōu)10號(hào)有37個(gè)點(diǎn)上調(diào)表達(dá),而兩優(yōu)培九上調(diào)表達(dá)的點(diǎn)36個(gè),其中有24個(gè)點(diǎn)在兩個(gè)水稻品種中表達(dá)差異較明顯。選擇其中6個(gè)進(jìn)行MALDI-TOF-MS/MS質(zhì)譜分析,得到3種蛋白質(zhì),分別為核酮糖1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶、1個(gè)是核糖體再循環(huán)因子、1個(gè)核酮糖二磷酸羧化酶/加氧酶激活酶。它們主要是植物參與光