1、本試驗(yàn)采用RT-PCR和RACE方法,首次克隆了中華絨螯蟹Δ6、Δ9去飽和酶基因全長cDNA序列,Δ6去飽和酶cDNA全長2278 bp,編碼442個(gè)氨基酸;Δ9去飽和酶全長2419 bp,編碼347個(gè)氨基酸。利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法對(duì)Δ6和Δ9去飽和酶基因在中華絨螯蟹各組織中的表達(dá)進(jìn)行分析。結(jié)果顯示Δ6和Δ9去飽和酶基因mRNA在各組織中廣泛表達(dá),在肝胰腺和腦神經(jīng)節(jié)組織中表達(dá)量最高。本試驗(yàn)為研究不同脂肪源飼料喂養(yǎng)中華絨螯蟹對(duì)去飽和酶基

2、因表達(dá)的影響,特設(shè)計(jì)了一個(gè)養(yǎng)殖試驗(yàn)。用四種不同比例魚油和豆油的飼料喂養(yǎng)幼蟹238天,油脂添加量為配合飼料量的3％,添加油脂分別為全魚油(FO)、魚油豆油比例為1:1(FO/SO)、全豆油(SO)以及對(duì)照組(Control),其中對(duì)照組添加的為配合飼料量3%的基礎(chǔ)脂肪酸。分別在養(yǎng)殖第168天和238天采集中華絨螯蟹肝胰腺樣品。結(jié)果表明在這兩次不同采樣時(shí)間喂養(yǎng)SO飼料的蟹肝胰腺中Δ6去飽和酶mRNA表達(dá)量較喂養(yǎng)FO飼料的蟹肝胰腺中Δ6去飽和

3、酶mRNA表達(dá)量均高。喂養(yǎng)SO飼料的蟹肝胰腺中Δ6去飽和酶mRNA在喂養(yǎng)238天后的表達(dá)量是喂養(yǎng)168后的表達(dá)量的2.45倍,而喂養(yǎng)FO飼料的蟹肝胰腺中Δ6去飽和酶mRNA在喂養(yǎng)238天和喂養(yǎng)168天后的表達(dá)量則基本保持不變。在Δ9去飽和酶的研究中發(fā)現(xiàn),從大眼幼體發(fā)育成成蟹的過程中,其mRNA在肝胰腺組織中表達(dá)有一個(gè)明顯增加的趨勢(shì)。使用不同配合飼料喂養(yǎng)中華絨螯蟹168天后對(duì)肝胰腺中Δ9去飽和酶的表達(dá)量進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果發(fā)現(xiàn)用FO飼料喂養(yǎng)的中

4、華絨螯蟹Δ9去飽和酶mRNA在肝胰腺中的表達(dá)量顯著高于用SO飼料喂養(yǎng)的中華絨螯蟹。
　　延伸因子(elongation factor, EF)是參與蛋白合成過程中肽鏈延伸的蛋白因子,包括延伸因子EF-1和延伸因子EF-2。延伸因子EF-1由α、β、γ和δ四個(gè)亞基組成,在蛋白翻譯過程中起著關(guān)鍵性作用。在本試驗(yàn)中,我們采用RT-PCR和RACE方法克隆了中華絨螯蟹延伸因子EF-1δ和EF-2基因全長cDNA。序列分析表明,中華絨螯蟹E

5、F-1δcDNA全長933 bp,編碼263個(gè)氨基酸; EF-2全長2752bp,編碼846個(gè)氨基酸。經(jīng)BLASTN和BLASTX軟件分析表明,此EF-1δcDNA核苷酸序列與非洲爪蟾EF-1δ核苷酸序列的同源性最高,其相似性為70%;所編碼的氨基酸序列與大紅斑蝶 EF-1δ的氨基酸序列相似性為54%。聚類分析表明,中華絨螯蟹EF-1δ的氨基酸序列與魚虱 EF-1δ聚為一支。此 EF-2核苷酸序列與鑲邊擬蠢蟹EF-2序列的同源性最高,其

6、相似性為88%;所編碼的氨基酸序列與甲殼動(dòng)物EF-2的氨基酸序列相似性都在90%以上。聚類分析顯示,中華絨螯蟹EF-2的氨基酸序列與鑲邊擬蠢蟹EF-2聚為一支,并與其它甲殼動(dòng)物聚為一體。熒光定量PCR結(jié)果顯示,EF-1δ在正常成熟中華絨螯蟹肌肉中表達(dá)量最高,精巢、肝胰腺中有少量表達(dá),心臟、卵巢、胃、腸、鰓中有微量表達(dá)。不同發(fā)育狀態(tài)的中華絨螯蟹 EF-1δ在肌肉組織中表達(dá)量均顯著高于肝胰腺和鰓組織中表達(dá)量(P<0.05);3個(gè)不同發(fā)育狀態(tài)

7、蟹EF-1δ在肌肉中的表達(dá)量也呈顯著性差異(P<0.05),其在早熟蟹肌肉中表達(dá)量最高,正常成熟蟹肌肉中次之,幼蟹肌肉中最低;不同發(fā)育狀態(tài)蟹 EF-1δ在肝胰腺和鰓組織中的表達(dá)沒有顯著差異(P>0.05)。EF-2在正常成熟中華絨螯蟹肌肉中表達(dá)量最高,精巢、肝胰腺中有少量表達(dá),心臟、卵巢、胃、腸、鰓中有微量表達(dá)。檢測(cè)了不同發(fā)育狀態(tài)的幼蟹、早熟蟹和正常成熟蟹EF-2在肝胰腺、鰓以及肌肉中的相對(duì)表達(dá)情況;同時(shí)也檢測(cè)了在不同pH處理下幼蟹EF