1、植物防御反應(yīng)分子機(jī)制的研究是闡明植物抗病機(jī)制,進(jìn)而進(jìn)行植物抗病性狀有效的遺傳改良的基礎(chǔ)。前人大量的研究表明,由R基因介導(dǎo)的抗病反應(yīng)在植物抗病中起關(guān)鍵性的作用,但不同植物R基因介導(dǎo)的抗病機(jī)制迄今仍不清楚。局部的ETI可以激發(fā)系統(tǒng)性的抗病反應(yīng)SAR(systemic acquired resistance)。NPR1是SAR中的重要調(diào)節(jié)蛋白,其結(jié)構(gòu)、功能及其與其它蛋白關(guān)系的分析有利于闡明SAR等R基因介導(dǎo)的抗病反應(yīng)機(jī)制。為了獲得NPR1基因

2、超表達(dá)和RNA干擾的煙草轉(zhuǎn)基因突變體用于分析其在抗病反應(yīng)中的作用及其與其它相關(guān)蛋白關(guān)系,本研究從辣椒cDNA文庫(kù)中篩選獲得一個(gè)NPR1全長(zhǎng)cDNA,構(gòu)建了其超表達(dá)載體和RNA干擾載體,分別轉(zhuǎn)化煙草獲得煙草轉(zhuǎn)基因植株。主要得出以下結(jié)論:
　　 1.從紫外處理的辣椒品種L-11葉片cDNA文庫(kù)中通過(guò)特異性引物PCR反應(yīng)擴(kuò)增獲得一個(gè)NPR1全長(zhǎng)cDNA,長(zhǎng)度約為1.8kbp,包含一個(gè)長(zhǎng)度為582氨基酸的完整ORF(Open Readi

3、ng Frame),其中含有BTB、DUF、ANK、NPR1-like四個(gè)保守結(jié)構(gòu)域。
　　 2.利用pDONR201、pk7WG2和pHELLSGATE12載體,通過(guò)Gateway載體構(gòu)建技術(shù)構(gòu)建了NPR1基因的超表達(dá)載體和RNA干擾載體,對(duì)這些載體進(jìn)行測(cè)序驗(yàn)證后利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化方法轉(zhuǎn)化煙草,獲得T0代超表達(dá)和RNA干擾煙草轉(zhuǎn)基因植株。
　　 3.對(duì)已獲得的煙草轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行了DNA微量提取,利用特異性引物PC