1、Lea和eIF5A都是參與了植物的抗逆脅迫。我們已經(jīng)在檉柳中分別克隆到了Lea和eIF5A基因。在此基礎(chǔ)上,擬對Lea基因的抗重金屬能力以及Lea和eIF5A基因共轉(zhuǎn)化山新楊進行研究。首先,利用實時定量RT-PCR技術(shù)研究了不同脅迫條件下Lea基因在檉柳中的時序表達模式。結(jié)果表明,Lea基因能夠應(yīng)答NaCl、ZnCl2、CdCl2以及CuSO4脅迫。亞細胞定位的結(jié)果表明,Lea-GFP蛋白定位于細胞質(zhì)和細胞核。
　　 為驗證Le

2、a基因?qū)χ亟饘倜{迫的抗性,選取本實驗室已經(jīng)轉(zhuǎn)入Lea基因山新楊4個株系和非轉(zhuǎn)基因山新楊對照株系(WT),轉(zhuǎn)基因株系分別為1-4號。對這5個株系組培苗進行了CdCl2脅迫試驗,從生長情況來看1號和2號抗性較強。選擇1號、2號和非轉(zhuǎn)基因山新楊進行脅迫分析逆境脅迫條件下非轉(zhuǎn)基因植株和這些轉(zhuǎn)基因植株的SOD活性、丙二醛(MDA)含量、POD活性、脯氨酸含量、可溶性蛋白含量等指標的變化。結(jié)果表明:脅迫7天后,轉(zhuǎn)Lea基因山新楊株系的SOD活性、P

3、OD活性、脯氨酸含量要高于非轉(zhuǎn)基因山新楊株系,而MDA含量以及可溶性糖含量要低于非轉(zhuǎn)基因山新楊株系。這說明Lea基因可能通過調(diào)控增強植物體內(nèi)活性氧清除能力、增加脯氨酸含量,調(diào)控可溶性蛋白的合成來提高植物對鹽脅迫耐受能力。
　　 將Lea和eIF5A基因構(gòu)建到植物表達載體pROKⅡ中,形成重組質(zhì)粒pROKⅡ-Lea-eIF5A。通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的山新楊的遺傳轉(zhuǎn)化,使兩個外源基因整合到山新楊基因組中。獲得了14個卡那霉素抗性株系,對轉(zhuǎn)