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![小麥葉片水分脅迫下cDNA-AFLP差異表達(dá)分析.pdf_第1頁](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/1/9/b1b5b553-7a60-4420-8594-c2bc1680aaaf/b1b5b553-7a60-4420-8594-c2bc1680aaaf1.gif)
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文檔簡(jiǎn)介
1、干旱是目前對(duì)作物生產(chǎn)力影響最大的環(huán)境脅迫因子,所造成的產(chǎn)量損失超過其他各種脅迫因子造成損失的總和。作物的抗旱性狀由多基因控制,受遺傳等因素影響。作物對(duì)干旱的耐受性在一定程度上具有相同的分子基礎(chǔ),很多基因的表達(dá)受水分脅迫的誘導(dǎo)并在作物抵抗水分脅迫中起作用。如何提高作物的抗旱性,使作物能夠在干旱脅迫環(huán)境下獲得較高的品質(zhì)和理想的產(chǎn)量,一直是人們關(guān)注的焦點(diǎn)和研究的熱點(diǎn)。探明耐旱作物對(duì)干旱脅迫的分子反應(yīng)機(jī)理,對(duì)作物抗旱育種以及抗旱栽培技術(shù)等研究具
2、有重要的現(xiàn)實(shí)意義。
本實(shí)驗(yàn)以新疆春小麥主栽品種新春6號(hào)為實(shí)驗(yàn)材料,新春6號(hào)是一個(gè)典型即抗旱又具備高水分利用效率的品種。利用cDNA-AFLP技術(shù)分析該品種在兩葉一心水分脅迫下基因表達(dá)的差異,建立了一套適合小麥葉片基因表達(dá)差異的研究體系,并獲得一些可能與小麥抗旱和水分高效利用相關(guān)的基因表達(dá)序列標(biāo)簽。研究結(jié)果如下:
(1)通過實(shí)驗(yàn)比較,確定了適合小麥葉片cDNA-AFLP分析的總RNA提取方法。
(
3、2)比較了兩套cDNA-AFLP方案,雙酶切法在實(shí)驗(yàn)結(jié)果的多態(tài)性、可靠性等方面優(yōu)于單酶切法,確定雙酶切法cDNA-AFLP更適合水分脅迫下小麥基因表達(dá)差異的研究。
(3)依據(jù)雙酶切法cDNA-AFLP基本原理,對(duì)技術(shù)體系進(jìn)行研究,并對(duì)擴(kuò)增體系進(jìn)行優(yōu)化,建立了一套適合小麥基因差異表達(dá)研究的cDNA-AFLP技術(shù)體系。
(4)實(shí)驗(yàn)對(duì)新春6號(hào)兩葉一心水分脅迫進(jìn)行了基因表達(dá)差異分析,利用253對(duì)選擇性擴(kuò)增引物分析,發(fā)
4、現(xiàn)748條差異條帶,回收了44個(gè),這些差異條帶均表現(xiàn)為上調(diào)差異類型。
(5)選取10條差異條帶進(jìn)行了克隆測(cè)序,利用BLAST對(duì)差異表達(dá)片段序列進(jìn)行序列同源性分析。10個(gè)序列在BLAST數(shù)據(jù)庫中均找到同源序列,主要涉及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、能量代謝、細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育和逆境響應(yīng)等類別:1)應(yīng)答水分脅迫的生長(zhǎng)發(fā)育基因:主要有與線粒體26rRNA基因和線粒體基因同源性較高的TDFHh2-1、TDFHh4-3和TDFHh3-3;與葉綠體D
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