1、植物開花過程是高等植物生活史中非常重要的一環(huán)，受環(huán)境信號和植物體內(nèi)部信號的共同調(diào)節(jié)。對植物花發(fā)育相關生理和分子生物學進行研究已是近20多年來植物生理學和植物生物學的熱點研究領域。研究發(fā)現(xiàn)，植物開花過程可分為三個階段：開花決定、花的發(fā)端、花器官形成和發(fā)育。LFY(LEAFY)基因在花發(fā)育的三個階段都起著重要的調(diào)節(jié)作用，它處于花發(fā)育相關基因調(diào)控網(wǎng)絡的中心位置。蔗糖被發(fā)現(xiàn)能夠通過影響LFY基因的激活而促進或延后開花。cDNA限制性片段長度多態(tài)

2、性(cDNA-AFLP)技術是一種高通量、基因組規(guī)模的轉(zhuǎn)錄組分析技術。
　　本研究通過一系列實驗建立了穩(wěn)定的cDNA-AFLP實驗體系，發(fā)現(xiàn)利用TRIzol法提取總RNA，利用EcoRⅠ和MseⅠ將cDNA酶切3 h，預擴增產(chǎn)物稀釋15倍作為選擇性擴增模板，可以獲得重復性較好的cDNA-AFLP指紋圖譜。通過引物篩選獲得了114對適合于文心蘭cDNA-AFLP分析的選擇性擴增引物。
　　依據(jù)建立的cDNA-AFLP分析體系，

3、對文心蘭Oncidium‘Milliongolds’花芽發(fā)育過程中的差異表達基因進行了分析。利用114對引物，總共獲得了約15960條TDFs。對其中1248條進行回收、克隆和測序，得到了993條可讀序列。BLASTX/N同源性比對分析所有獲得的序列，發(fā)現(xiàn)80％以上的TDFs都能夠在數(shù)據(jù)庫中找到功能已知的同源序列。其中281條已提交至dbEST數(shù)據(jù)庫，GenBank登陸號為JG014357~JG014634。依據(jù)比對分析的結(jié)果將測序獲得

4、的TDFs歸入不同的功能類型，主要包括代謝(16.7%)、基因表達調(diào)控(7.3%)、信號轉(zhuǎn)導(4.4%)、能量(1.4%)和物質(zhì)運輸(1.5%)等。
　　利用反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)法克隆了文心蘭SUS1(SUCROSE SYNTHASE1)和LFY基因的全長mRNA序列，GenBank登陸號分別為JF416946和HM358866。文心蘭SUS1和LFY基因開放閱讀框分別長2448 bp和1125 bp。序列分析發(fā)現(xiàn)它們與蝴

5、蝶蘭、莫氏蘭等蘭科植物中相應基因的同源性最高，而且與單子葉植物中相應基因的同源性高于其與雙子葉植物中相應基因的同源性。
　　對SUS1、LFY和PFT1(PHYTOCHROME AND FLOWERING TIME PROTEIN1)進行了定性和熒光定量表達分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，SUS1和LFY基因的表達模式非常相似，而PFT1表達模式與前二者不同。為探索SUS1基因在花發(fā)育過程中可能發(fā)揮的功能，測定了不同組織中糖類物質(zhì)的含量和蔗糖合成