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文檔簡介
1、河豚毒素(Tetrodotoxin,簡稱TTX)是一種劇毒的海洋生物毒素,其微量制劑具有很好的局部麻醉和鎮(zhèn)痛效果。河豚魚中廣泛分布河豚毒素,是一種珍稀的海洋藥物資源。我國東南沿海河豚魚資源豐富,毒性分布相當(dāng)復(fù)雜。目前,除個別品種的低毒部位用于加工出口外,高毒品種和生產(chǎn)過程中剔除的高毒部位大量廢棄,既造成了資源浪費(fèi),也帶來了一定的環(huán)境污染。
本文調(diào)查了東南沿海常見河豚魚的毒性分布情況,對TTX的超聲輔助提取和柱層析純化工藝進(jìn)
2、行了系統(tǒng)的研究,旨在尋找一種高效、低廉、可操作性強(qiáng)的生產(chǎn)方法,研究結(jié)果如下:
1、通過形態(tài)學(xué)特征對福建、廣東沿海采集的132條河豚魚進(jìn)行品種鑒定,并采用小鼠生物試驗(yàn)法和酶聯(lián)免疫檢測法研究其毒性分布。結(jié)果表明:采集的河豚魚共12種,主要為腹刺鲀屬和東方鲀屬,其中腹刺鲀屬是主導(dǎo)魚類,占總樣本量的75.8[%];TTX在河豚魚種和魚體不同部位間的分布差異極顯著,主要集中在卵巢和肝臟,皮和肌肉多數(shù)為無毒或弱毒,而月腹刺鲀?nèi)~有毒,
3、卵巢毒力高達(dá)251.4 MU,是最佳的提毒原料。
2、采用L9(34)正交試驗(yàn)和響應(yīng)面分析法對傳統(tǒng)水浴法和超聲輔助法提取月腹刺鲀卵巢TTX的工藝條件進(jìn)行了優(yōu)化和比較,結(jié)果表明:以0.1[%]的乙酸為提取溶劑,液料比4:1,80 ℃水浴下提取2次(10 min/次),月腹刺鲀卵巢TTX的得率為50.23 μg/g;液料比3:1,超聲頻率40 kHz,功率40 W,40 ℃水浴下提取1次(22 min/次),月腹刺鲀卵巢TTX
4、的得率為63.57 μg/g,比傳統(tǒng)水浴提取法提高26.6[%]。
3、以超聲輔助法提取的TTX粗提液為原料,對D152離子交換樹脂、顆?;钚蕴亢虰io-Gel P2凝膠柱層析依次純化TTX工藝進(jìn)行了研究。結(jié)果表明:TTX粗提液在pH 5.0、上樣流速6 mL/min的D152樹脂吸附條件下,以洗脫流速1.8 BV/h、洗脫體積7 BV的2[%]乙酸洗脫效果最佳,回收率高達(dá)98.4[%],純度為0.33[%];樹脂純化液在
5、pH 7.0、上樣量50 mL、上樣流速2 mL/min的活性炭吸附條件下以洗脫流速6.0 BV/h、洗脫體積8 BV的1[%]~5[%]的乙酸進(jìn)行梯度洗脫效果最佳,回收率為92.5[%],純度為4.93[%];活性炭純化液在pH 7.0、上樣量4.0 mL、上樣濃度450 μg/mL的凝膠層析條件下,以洗脫流速6.0 BV/h、洗脫體積1 BV的純水和2 BV的1[%]乙酸分步洗脫效果較佳,回收率為89.4[%],純度為46.6[%]
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