1、該文通過一種改進后的方法,即通過縮短DEAE-cellulose-52柱的長度,以及提高洗脫液的pH,可在9h內(nèi)從菠菜、菜心和豆角綠葉中純化GO同工酶.證實該GO同工酶具高活性(90~197.U/mg.min)和高pI(pI>10.0).SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)表明,該GO同工酶均有40kD主帶.初步證實不同植物中的GO同工酶的亞基Mr是相同的.多次純化菜心中的GO同工酶.醋酸薄膜電泳表明其pI>10.0,而等電聚

2、焦電泳(IEF-PAGE)則表明,該GO同工酶可產(chǎn)生從4.5~10.0的近10種pI.在SDS-PAGE電泳中,GO同工酶始終只存在40kD主帶,表明GO同工酶pI的變化與40kD亞基降解無關.菜心GO同工酶的SDS-PAGE和SDS-毛細管電泳(CE-SDS)顯示,該酶除了含40kD主帶外,還有很淺的66kD帶,和之前我們提出的菠菜GO同工酶含40kD酸性亞基和66kDD堿性亞基相似;SDDS-PAGE和CE-SDS電泳中,無論加入β

3、-巰基乙醇與否,GO同工酶都只有40kDD主帶和66kD淺帶,表明菜心GO同工酶中40kDD酸性亞基和66kD堿性亞基不是以共價二硫鍵相連;用制備性SDDS-PAGE法獲得菜心GO同工酶的40kD亞基,并和菜心GO同工酶一起測定其氨基酸組成,該GO同工酶及40kD亞基的堿/酸性氨基酸的比例分別為0.66和0.54,表明40kD亞基可能是個酸性蛋白,而66kD帶則是個堿性蛋白.SDS-PAGE、CE-SDS和氨基酸測定表明,和菠菜GO同工