谷蛋白Gt1基因啟動子引導玉米Lc基因表達載體構(gòu)建及轉(zhuǎn)化常規(guī)水稻與紫稻.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、有色稻米屬于功能性稻米的一種,除了與普通稻米一樣具有豐富的營養(yǎng),還含有一些不提供營養(yǎng)但是對人體生理功能起調(diào)節(jié)和平衡作用的特殊成分,例如類黃酮、花色素苷、生物堿、強心苷等生理活性物質(zhì),食用有色稻米對人體大有裨益。有色稻米由于其出眾的營養(yǎng)品質(zhì)和生理功能,使得對其品種改良及育種工作越來越受到人們的重視,但是一些固有的種質(zhì)缺陷仍舊制約著有色稻米的進一步開發(fā)與利用。利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)進一步提高有色稻米的營養(yǎng)品質(zhì),不失為對該大類稻米品種功能拓展的新方法

2、。
   Lc基因?qū)儆谟衩識基因家族,編碼一類MYC型轉(zhuǎn)錄因子,是玉米花色素苷合成途徑中的調(diào)節(jié)基因。研究表明在多種植物中異源表達玉米花色素苷調(diào)節(jié)基因Lc,能夠使轉(zhuǎn)基因植株的類黃酮含量得到不同程度提高。本研究以水稻種子中特異高表達的谷蛋白Gtl基因5.3kb啟動子構(gòu)建了不含有Gtl基因信號肽序列的pCAMBIAl301-Gtl-Le表達載體,與本實驗室保存、同樣以Gtl基因5.3kb啟動子引導Lc基因,但含有信號肽序列的pCAMB

3、IAl301-Gtl(S)-Lc分別轉(zhuǎn)入常規(guī)水稻與紫稻中。并在紫稻中首次成功實現(xiàn)遺傳轉(zhuǎn)化操作。
   在成功構(gòu)建表達載體并獲得四個類別共85棵轉(zhuǎn)基因后,對轉(zhuǎn)基因植株進行PCR檢測,結(jié)果顯示Lc基因已經(jīng)整合到常規(guī)稻與紫稻基因組中。部分轉(zhuǎn)基因常規(guī)稻植株稻米顏色出現(xiàn)變化。對轉(zhuǎn)基因植株RT-PCR檢測,結(jié)果顯示Lc基因能夠在水稻幼嫩種子中表達,同時對部分類黃酮合成相關(guān)酶基因的表達產(chǎn)生一定的影響。在常規(guī)稻轉(zhuǎn)基因植株(C17)幼嫩種子中,P

4、AL、CHS、F3'H表達量比對照增加;F3H和DFR在對照中沒有表達,而在轉(zhuǎn)基因植株中出現(xiàn)了表達。在紫稻轉(zhuǎn)基因植株(P19)幼嫩種子中,PAL、CHS、ANS、F3'H表達量比對照增加;LAR在對照中沒有表達,而在轉(zhuǎn)基因植株中出現(xiàn)了表達。對常規(guī)稻及紫稻轉(zhuǎn)基因稻米黃酮含量檢測結(jié)果顯示其總黃酮含量不同程度提高,常規(guī)稻轉(zhuǎn)化子C17的總黃酮含量提高了四倍。對總黃酮含量提高明顯的植株進行稻米長、寬、厚、以及千粒重等農(nóng)藝性狀檢測,與對照材料相比沒

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