1、吉富羅非魚是遺傳性狀改良后的尼羅羅非魚（Genetic Improvement of FarmedTilapia Strain of Nile tilapia，Oreochromis niloticus），現(xiàn)已成為我國一個新的重要養(yǎng)殖品種。由于飼料營養(yǎng)失衡，如長期投喂低蛋白、高脂肪、高糖類和缺乏維生素的餌料，造成羅非魚肝損害，生產(chǎn)存在規(guī)格小、品質(zhì)差等問題。脂肪是魚類重要的營養(yǎng)素，它的性質(zhì)決定了其獨特的生物學(xué)功能及其他營養(yǎng)素難以替代的作用

2、．為探討吉富羅非魚對飼料脂肪適宜需求量及飼料脂肪水平對脂肪代謝及其關(guān)鍵酶的調(diào)節(jié)機制，本文開展了飼料中不同脂肪水平對吉富羅非魚生長，體脂沉積及脂肪酸組成的影響研究，首次克隆了吉富羅非魚脂肪酸合成酶（fatty acid synthetase，F(xiàn)AS），脂蛋白脂酶(lipoproteinlipase，LPL)cDNA序列，并開展了飼料脂肪水平及再投喂對吉富羅非魚脂肪酸合成酶、脂蛋白脂酶活性及其基因表達水平、血液脂肪代謝生化指標的調(diào)節(jié)研究．<

3、br>　　 1飼料脂肪水平對吉富羅非魚生長、營養(yǎng)物質(zhì)消化、肌肉成分及血液生化指標的影響
　　 為探討吉富羅非魚對脂肪的適宜需求，將630尾（2.63±0.169）吉富羅非魚隨機分成6組，每組設(shè)置3個重復(fù)，每個重復(fù)35尾，其中第1組為對照組，投喂基礎(chǔ)日糧（未添加魚油，含脂肪1.73％），另外5組為試驗組，飼喂在基礎(chǔ)日糧中分別添加2%，4%、6%、8%、15%的魚油含不同脂肪水平(3.71%、5.69%、7.67%、9.64%和1

4、6.55%)的等氮飼料，飼養(yǎng)90 d，試驗結(jié)束時，測定增重率、飼料系數(shù)、營養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率，禁食48 h，每個水族箱隨機取3尾魚，測定肌肉常規(guī)營養(yǎng)成分，腸道消化酶活性及血液常規(guī)生化指標．結(jié)果顯示，隨著飼料脂肪水平的提高，增重率和特定生長率呈現(xiàn)先升后降的趨勢，蛋白質(zhì)效率顯著提高(P<0.05)，而飼料系數(shù)顯著下降（P

5、肪水平對粗蛋白表觀消化率和飼料干物質(zhì)表觀消化率無顯著影響（P>O.05），增加飼料脂肪水平顯著提高了粗脂肪和磷的表現(xiàn)消化率（P<0.05）；隨著飼料脂肪水平的升高，羅非魚肌肉脂肪含量上升，變化范圍為9.96%～17.27%，水分、粗蛋白、粗灰分及磷含量均呈下降趨勢；吉富羅非魚胃和腸道中蛋白酶活性沒有顯著變化（P>O.05），前腸和中腸的脂肪酶活性顯著下降（P

6、組血液中白蛋白和白球比均顯著高于其他組（P<0.05），隨著飼料脂肪水平的提高，膽固醇及堿性磷酸酶顯著上升（P0.05）。結(jié)果表明，飼料中一定含量的脂肪水平可以促進吉富羅非魚生長，提高吉富羅非魚對脂肪和磷的表觀消化率，但脂肪水平過高會對魚體增重及血液生化指標產(chǎn)生負作用，因此，在生產(chǎn)上吉富羅非魚幼魚對飼料中脂肪的適宜需求

7、量為7.67%-9.34%。
　　 2飼料脂肪水平對吉富羅非魚體脂沉積及脂肪酸組成影響
　　 飼養(yǎng)方案同1，飼養(yǎng)90 d，試驗結(jié)束時，禁食48 h后，每一水族箱隨機取3尾魚的進行解剖，測定吉富羅非魚的部分形體指標、肌肉肝臟及腹腔脂肪組織的脂肪沉積及脂肪酸組成。試驗結(jié)果顯示：5.69%、7.67%及9.64%脂肪組吉富羅非魚肥滿度較高；1.73%和16.55%脂肪組的肝體指數(shù)顯著高于其他試驗組(P<0.05)；除了1.73

8、%脂肪組，其他各組中飼料脂肪水平越高，魚體的臟體指數(shù)越高。7.67%脂肪組吉富羅非魚肌肉脂肪含量顯著高于3.71%組（P<0.05），同時顯著低于16.55%組（P<0.05），但是其肝臟中脂肪含量與其他各組差異均不顯著(P>0.05)；飼料脂肪水平越高，魚體的脂肪含量越高，同時不飽和脂肪酸占總脂肪酸中的比例越高。結(jié)果表明，飼料脂肪水平影響吉富羅非魚的部分形體指標，尤其對肝臟形態(tài)的影響較為明顯。飼料中過多的脂肪容易在肌肉和肝臟組織中沉積

9、，同時魚體的脂肪含量和脂肪酸組成能夠反映飼料的脂肪水平和脂肪酸組成。
　　 3吉富羅非魚FAS、LPL基因的克隆及序列分析
　　 采用RT-PCR和eDNA末端快速擴增法(rapid amplification of cDNA ends，RACE)克隆了吉富羅非魚FAS基因部分序列(GenBank: GU433188)及LPL基因的cDNA全長序列(GenBank: GU433189)．克隆得到的吉富羅非魚FAS基因的部

10、分cDNA序列長557 bp，編碼185個氨基酸，序列分析表明吉富羅非魚脂肪酸合成酶與其他物種的同源性為62%-82%．吉富羅非魚LPL基因的eDNA全長2298 bp，編碼515個氨基酸，序列分析表明吉富羅非魚脂蛋白脂酶與其他物種的同源性為57.3%～87.9%．一些重要的功能位點如脂肪結(jié)合域( lipid binding domain，LID)等在進化的過程中較為保守。同源建模分析顯示LPL具有典型的脂肪酶家族結(jié)構(gòu)．
　　

11、4飼料脂肪水平和再投喂對吉富羅非魚脂肪酸合成酶活性及表達的影響
　　 為研究飼料脂肪水平對吉富羅非魚FAS活性和表達的影響，選擇平均體重為（2.63±0.16）g的健康的315尾吉富羅非魚幼魚，隨機分成3組，每組3個重復(fù)，投喂3組不同脂肪水平（飼料中脂肪含量分別為3.71%、7.67%和16.55%）的等氮低脂肪組、中脂肪組、高脂肪組飼料，以低脂肪組為對照組，飼養(yǎng)90 d，試驗結(jié)束時，禁食48 h，從每一水族箱隨機取3尾魚取其肝

12、臟及肌肉，再投喂后6、12、24、48 h時再從每個水族箱（每個平行組）取3尾魚取肝臟樣品，測定吉富羅非魚肝臟中FAS的生物活性，使用熒光實時定量PCR分別測定飼喂3.71%組、7.67%組和16.55%組飼料的吉富羅非魚肝臟和肌肉中FAS mRNA的表達豐度以及再投喂后6、12、24、48 h肝臟中FAS mRNA的表達豐度。結(jié)果顯示：飼料脂肪水平對肝臟中FAS活性無顯著影響（P>0.05）；肝臟中FAS mRNA的表達豐度顯著高于肌

13、肉（P<0.05）；肝臟和肌肉中FAS mRNA的表達豐度隨著飼料中脂肪水平增加而顯著下降（P<0.05）；再次投喂后6～48 h，各個組的肝臟中FAS mRNA表達豐度顯著下降（P<0.05）。結(jié)果說明，高脂肪飼料對肝臟中FAS活性分泌無誘導(dǎo)作用，吉富羅非魚肝臟中FAS mRNA的表達豐度高于肌肉，高脂肪飼料能夠抑制FAS mRNA表達，脂肪水平越高抑制作用越顯著，再投飼后6～48 h，F(xiàn)AS基因表達受到抑制．
　　 5飼料脂

14、肪水平和再投喂對吉富羅非魚脂蛋白脂酶活性及表達的影響
　　 飼養(yǎng)方案同4，飼養(yǎng)90 d，試驗結(jié)束時，禁食48 h，每一水族箱隨機取3尾魚的肝臟及肌肉，再投喂后6、12、24、48 h分別從每個水族箱（每個平行組）取3尾魚取肝臟樣品，使用實時熒光定量PCR分別測定了飼喂3.71%組、7.67%組和16.55%組飼料的吉富羅非魚肝臟和肌肉中LPL mRNA的表達豐度以及禁食48小時再投喂后6、12、24、48 h肝臟中LPLmRNA

15、的表達豐度。結(jié)果顯示：LPLmRNA在吉富羅非魚肝臟和肌肉中均有表達，但肝臟中LPL mRNA表達豐度顯著高于肌肉中LPL mRNA表達豐度；隨著飼料脂肪水平的升高，肝臟中LPL mRNA表達水平出現(xiàn)升高的趨勢，16.55%高脂肪水平組LPL mRNA表達最高，顯著高于3.71%低脂肪水平組（P<0.05）；禁食（饑餓）48h后，吉富羅非魚肝臟LPL mRNA表達水平最高，再投喂后12h顯著下降，到48 h又逐漸回到饑餓時表達水平．研究

16、表明：高脂肪顯著促進了吉富羅非魚肝臟LPL活性的分泌；LPLmRNA在吉富羅非魚肝臟和肌肉中表達具有組織特異性，且肝臟是吉富羅非魚LPL合成和表達的主要組織器官之一；高脂肪誘導(dǎo)了吉富羅非魚肝臟LPL基因表達，同時吉富羅非魚肝臟LPL基因表達受到飼養(yǎng)狀態(tài)（飽食、饑餓）的調(diào)控．
　　 6飼料脂肪水平和再投喂對吉富羅非魚血脂、血糖的影響
　　 為研究高脂肪飼料和再投喂對吉富羅非魚攝食后血液脂肪代謝的影響，選擇平均體重為（2.6

17、3±0.16）g的健康的315尾吉富羅非魚幼魚，隨機分成3組，每組3個重復(fù)，投喂3組不同脂肪水平（飼料中脂肪含量分別為3.71%，7.67%和16.55%）的等氮低脂肪組、中脂肪組、高脂肪組，以低脂肪組為對照組，飼養(yǎng)90 d，試驗結(jié)束后，禁食24 h，取樣測定血液中脂肪代謝相關(guān)指標，再禁食24 h投喂，攝食3.71%組、7.67%組和16.55%組飼料后0、6、12、24、48 h每個水族箱隨機取樣3尾取樣測定試驗魚血清中甘油三酯、膽固

18、醇及血糖。結(jié)果顯示：高脂肪飼料使吉富羅非魚血清甘油三酯、膽固醇、堿性磷酸酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶顯著升高(P<0.05)，血糖顯著下降(P<0.05)；吉富羅非魚攝食不同脂肪水平飼料后，48 h內(nèi)，其血液甘油三酯、膽固醇和血糖均呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，在攝食后同一時間點，攝食高脂肪試驗魚血液中甘油三酯和膽固醇顯著高于低脂肪組（P<0.05），而血糖無顯著變化，但有下降的趨勢（P>0.05）．結(jié)果說明：高脂肪(16.55%)誘導(dǎo)吉富羅非魚肝臟受到一