1、氨基酸及其代謝產(chǎn)物對人和動物的健康有重要意義。由于小腸在解剖結(jié)構(gòu)上處于優(yōu)先利用攝入氨基酸的地位，小腸日糧氨基酸的代謝可直接影響氨基酸進(jìn)入門靜脈循環(huán)的模式，從而影響整個機(jī)體對氨基酸的利用。目前，關(guān)于小腸內(nèi)氨基酸代謝情況存在許多爭議，關(guān)于小腸內(nèi)氨基酸的微生物代謝和轉(zhuǎn)化情況鮮有報道。因此，本文旨在探究豬小腸微生物體外代謝氨基酸情況，分離鑒定豬小腸氨基酸代謝菌，為研究小腸內(nèi)氨基酸的微生物代謝機(jī)理、轉(zhuǎn)化途徑和調(diào)控機(jī)制提供理論基礎(chǔ)。
　　

2、第一部分：體外法研究豬小腸微生物對氨基酸的代謝。通過體外培養(yǎng)研究豬小腸各腸段微生物對精氨酸、谷氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、蘇氨酸、色氨酸和纈氨酸的代謝情況。分別接種十二指腸、空腸、回腸微生物處理液至含有10 mmol/L上述不同氨基酸的培養(yǎng)基中，體外發(fā)酵24h。0h、6h、12h、24h取樣，用HPLC測定各組發(fā)酵液中游離氨基酸濃度，計算氨基酸消失率，分析各腸段微生物對氨基酸的代謝規(guī)律。試驗結(jié)果表明

3、，體外發(fā)酵24h，十二指腸組、空腸組和回腸組中賴氨酸、蘇氨酸、組氨酸、精氨酸、谷氨酸和支鏈氨基酸的消失率顯著高于蛋氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和脯氨酸（P<0.01）；十二指腸、空腸和回腸微生物對同種氨基酸的代謝情況存在差異。提示，豬小腸微生物可能對小腸內(nèi)賴氨酸、蘇氨酸、精氨酸、谷氨酸、組氨酸和支鏈氨基酸的代謝有重要影響。
　　 第二部分：豬小腸氨基酸代謝菌的分離和篩選。為了研究豬小腸氨基酸代謝菌的物種資源，該試驗對賴氨酸、蘇氨酸、組

4、氨酸、谷氨酸和精氨酸代謝菌進(jìn)行分離和篩選。利用改良型的Hungate滾管技術(shù)，根據(jù)菌落形態(tài)差異挑選出氨基酸代謝菌疑似菌株30株。將疑似菌株菌液接種到含有其對應(yīng)氨基酸的培養(yǎng)基中，體外發(fā)酵24h。通過HPLC測定發(fā)酵液中游離氨基酸濃度，計算氨基酸消失率，篩選可代謝氨基酸的菌株。將篩選出的氨基酸代謝菌菌液接種到含有其對應(yīng)氨基酸的培養(yǎng)基中，進(jìn)行復(fù)篩。本試驗共分離氨基酸代謝菌13株。其中，賴氨酸代謝菌3株，命名為L1、L2和L3，單菌發(fā)酵液中賴氨

5、酸消失率分別為83.17％、47.17％和85.70％。蘇氨酸代謝菌2株，命名為T1和T2，單菌發(fā)酵液中蘇氨酸消失率分別為14.34％和2.09％。組氨酸代謝菌2株，命名為H1和H8，單菌發(fā)酵液中組氨酸消失率分別為8.72％和4.60％。精氨酸代謝菌3株，命名為A1、A3和A4，單菌發(fā)酵液中精氨酸消失率分別為5.81％、21.41％和15.23％。谷氨酸代謝菌3株，命名為G4、G9和G10，單菌發(fā)酵液中谷氨酸消失率分別為15.44％、3

6、3.26％和5.75％。試驗結(jié)果表明，除賴氨酸代謝菌外，其余單菌的氨基酸代謝率顯著低于小腸各腸段混合菌的代謝率。
　　 第三部分：豬小腸氨基酸代謝菌的鑒定與分類。為了進(jìn)一步探究豬小腸氨基酸代謝菌的種類和特征，本試驗對菌株L1、L2、L3、T1，H1、H8、A3、A4、G4和G9進(jìn)行了形態(tài)、生化和16SrRNA基因序列鑒定。形態(tài)和生化鑒定結(jié)果表明，菌株L1、L2、L3和G9為克雷伯屬（Klebsiella）細(xì)菌；T1、G4和H1為

7、大腸桿菌（Escherichiacoli）；H8、A3和A4為鏈球菌屬（Streptococcus）細(xì)菌。系統(tǒng)進(jìn)化樹分析結(jié)果表明，L2、L3與Klebsiella pneumoniae strain K42和Klebsiella pneumonia ATCC13883T位于同一個分枝內(nèi)，相似性達(dá)99％。G9和Klebsiella pneumoniae strain ECU-15位于同一個分枝內(nèi)，相似性達(dá)99％。A3與Streptococ