1、豬鏈球菌(Streptococcus suis,簡稱S.suis)是一種重要的人獸共患病病原菌,可引起豬患腦膜炎、肺炎、關節(jié)炎、敗血癥甚至急性死亡,還可以感染人并導致腦膜炎、敗血癥、心內膜炎以及罕見的鏈球菌中毒性休克綜合征(Streptococcaltoxic shock syndrome,STSS)等,不僅給全世界的養(yǎng)豬業(yè)造成巨大損失,而且也造成了嚴重的公共衛(wèi)生事件。因此S.suis感染的預防控制及致病機制的研究成為亟待解決的問題。<

2、br>　　 通常表面抗原比較保守,廣泛分布于不同的分離株中,而且容易接觸機體免疫系統(tǒng)引起免疫應答,有很強的免疫保護作用。研究者開始從S.suis菌體表面抗原著手,篩選有效的保護性抗原。所以本試驗第一部分中對細菌表面新近發(fā)現(xiàn)蛋白Sao進行了表達純化等工作。此外,許多研究表明細胞壁或提純后的細胞壁成分能夠加重被感染宿主的炎癥反應等,與S.suis的致病性相關。因此本試驗第二部分利用同源重組原理構建了sao基因敲除突變株,并對其進行了初步研

3、究。
　　 1.Sao蛋白的原核表達及特性研究本研究從S.suis2中國強毒株05ZYH33中克隆表達出重組蛋白rSao,利用純化后的rSao制備了該蛋白的兔多抗血清。利用全菌豬抗血清對重組蛋白進行western blot分析,結果有明顯的條帶出現(xiàn),表明該蛋白在S.suis2感染過程中表達并能激發(fā)宿主的體液免疫應答。重組Sao蛋白的高效價兔多抗血清能夠促進人全血對細菌的殺傷作用。Sao蛋白能競爭抑制S.suis對Hep-2細胞的

4、黏附,提示Sao蛋白可能參與細菌黏附過程。
　　 2.SaD基因敲除突變株的構建及特性研究為了進一步研究Sao在S.suis2致病性過程中的作用,通過同源重組原理構建了sao基因敲除突變株,并通過PCR、RT-PCR、Western blot方法對其進行了鑒定,證實突變株構建成功。生物學特性分析顯示野生株與突變株在生長特性、菌落形態(tài)和溶血活性方面沒有明顯差異；動物實驗結果表明突變株與野生株相比對BABL/c小鼠的毒力未發(fā)生明顯改