1、銀杏(Ginkgo biloba L.)是第四紀(jì)冰川之后唯一在我國保存下來的一孑遺物種，素有“活化石”之稱。在其漫長(zhǎng)的演化歷程中，銀杏的種子和葉片發(fā)生了明顯的變異。1891年，Shirai在日本發(fā)現(xiàn)世界上第一株葉籽銀杏(Ginkgo biloba L.var.epiphylla Mak.)，1982年，董春耀發(fā)現(xiàn)在山東省沂源縣的一株葉籽銀杏，1984年，郭善基對(duì)其進(jìn)行了報(bào)道，這是在我國發(fā)現(xiàn)的第一株葉籽銀杏。作為銀杏家族中的特異種質(zhì)資源，

2、葉籽銀杏具有重要的觀賞價(jià)值和科研價(jià)值。目前對(duì)于葉籽銀杏研究主要集中形態(tài)學(xué)觀察，而對(duì)于葉籽銀杏的分類地位及系統(tǒng)進(jìn)化尚無定論，因此，需要從分子技術(shù)方面探討葉籽銀杏的變異機(jī)制。 本研究以2株銀杏和來自中國的26株葉籽銀杏、日本的1株葉籽銀杏為試材，使用Hamilton等(1999)設(shè)計(jì)的trnS-trnG序列通用引物：上游引物(5'-GCCGCTTTAGTCCACTCAGC-3')和下游引物(5'-GAACGA-ATCACACTTTT

3、ACCAC-3')，用PCR方法從銀杏和葉籽銀杏總DNA中擴(kuò)增trnS-trnG基因片段，并用DH5a大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行克隆，在含氨芐青霉素和涂布IPTG/X-gal的LB平板上進(jìn)行藍(lán)白斑篩選后從菌液中提取質(zhì)粒經(jīng)PCR檢測(cè)，陽性克隆重組用于測(cè)序。用ClustalX1.83程序進(jìn)行對(duì)位排序，對(duì)齊后的序列加以人工檢驗(yàn)，用得到的序列構(gòu)建基因樹。 克隆測(cè)得的27株葉籽銀杏和2株銀杏樣品的trnS-trnG基因序列的長(zhǎng)度大

4、部分是1005bp，最短的為來自沂源的YZ4。序列分析結(jié)果表明，trnS-trnG基因序列T堿基含量多。T、C、A、G四種堿基的平均含量分別為31.28％、19.43％、31.04％和18.24％，各樣品間的堿基含量差異極小。葉籽銀杏trnS-trnG序列富含A/T。27株葉籽銀杏和2株銀杏樣品的trnS-trnG基因序列排序后長(zhǎng)度為1008bp，包括34個(gè)堿基變異位點(diǎn)，變異類型均為堿基的替換，其中包括三個(gè)信息位點(diǎn)，分別位于34bp、3

5、7bp和359bp處。 基于trnS-trnG基因序列各樣品間的K2p遺傳距離為0～0.0081，平均遺傳距離為0.0027，遺傳距離極小，在種內(nèi)變異的范圍之內(nèi)。trnS-trnG基因序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹，樹長(zhǎng)為684步，一致性指數(shù)(CI)為0.9853，保持性指數(shù)(RI)為0.8361。其嚴(yán)格一致樹的一致性指數(shù)較高，說明trnS-trnG序列在銀杏和葉籽銀杏之間發(fā)生變異的頻率非常低，銀杏和葉籽銀杏樣品之間沒有得到很好的分支，來