菊芋懸浮細(xì)胞中菊糖及酚類物質(zhì)的誘導(dǎo).pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、菊芋(Helianthus tuberosus)是菊科(Asterceae)向日葵屬的多年生草本植物,塊莖富含的菊糖為工業(yè)果糖的重要來(lái)源,葉片、塊莖的提取物及分泌物具有抗細(xì)菌、抗真菌及抗癌活性。菊芋具有很強(qiáng)的抗逆能力,在土壤改良、荒漠治理及水土保持方面也體現(xiàn)重要的生態(tài)價(jià)值,因此菊芋已成為具有經(jīng)濟(jì)和生態(tài)雙重價(jià)值潛力的重要工業(yè)作物。本文通過(guò)植物組織培養(yǎng)技術(shù)獲得了菊芋懸浮培養(yǎng)細(xì)胞,并以此為研究對(duì)象,研究了茉莉酸甲酯、水楊酸、殼聚糖、酵母提取物

2、、綠色木霉、AgNO36種誘導(dǎo)子對(duì)菊糖(含量、產(chǎn)量及聚合度)和酚類物質(zhì)(總酚、組分)的誘導(dǎo)。
  (1)通過(guò)對(duì)菊芋葉片、莖節(jié)及塊莖3種外植體在愈傷組織誘導(dǎo)率、形態(tài)及于重的比較,結(jié)合NAA與6-BA和KT的激素組合篩選,確定了菊芋愈傷組織誘導(dǎo)的最佳外植體為莖節(jié),培養(yǎng)基為MS+1.0mg/L NAA+1.0mg/L6-BA。進(jìn)一步,通過(guò)接種量、繼代原液保留量、蔗糖濃度、氮源添加等條件的優(yōu)化,建立了菊芋細(xì)胞懸浮培養(yǎng)體系:培養(yǎng)基為MS+1

3、.0mg/L NAA+1.0mg/L6-BA+0.5mg/L脯氨酸+1.0mg/L谷氨酰胺,蔗糖30g/L,接種量4g/100mL液體培養(yǎng)基,繼代原液保留量為20mL。獲得了最佳生長(zhǎng)曲線:0-4天為遲滯期,6-18天為對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,之后為穩(wěn)定期。
  (2)6種誘導(dǎo)子對(duì)菊芋懸浮細(xì)胞中菊糖的誘導(dǎo)效果依次為:茉莉酸甲酯(250μmol/L)>AgNO3(10μmol/L)>水楊酸(75μmol/L)>殼聚糖(40mg/L)>綠色木霉(9

4、0mg/L)>酵母提取物(0.25mg/L),相應(yīng)的菊糖含量增加了1.43、1.05、0.93、0.76、0.44、0.18倍,相應(yīng)的菊糖產(chǎn)量分別提高了2.09、3.60、1.26、1.76、1.06、0.09倍。
  6種誘導(dǎo)子均顯著提高菊芋懸浮細(xì)胞中低聚合度(聚合度Dp2-20)菊糖的比例。茉莉酸甲酯對(duì)Dp2-8的菊糖誘導(dǎo)效果顯著,尤其誘導(dǎo)Dp6菊糖比例由2.17%增加到29.15%。水楊酸顯著誘導(dǎo)增加Dp2-17菊糖的比例,

5、特別是Dp2-4菊糖比例分別由8.16%、6.79%、7.17%提高到20.86%、14.79%、18.53%。殼聚糖對(duì)Dp4菊糖誘導(dǎo)效果最為顯著,比例由0.51%增加到56.42%。酵母提取物及綠色木霉顯著增加了Dp3和Dp4菊糖的比例,Dp3菊糖比例分別增加到50.78%(對(duì)照28.04%)、38.12%(對(duì)照22.77),Dp4菊糖比例分別增加到58.83%(對(duì)照1.78%)、51.22%(對(duì)照32.57%)。AgNO3增加了Dp

6、3-12菊糖比例,其中Dp7菊糖效果最顯著,由0.01%增加到11.15%。
  結(jié)合菊芋懸浮細(xì)胞中菊糖含量以及低聚合度菊糖比例確定了6種誘導(dǎo)子的最佳處理濃度和時(shí)間為:茉莉酸甲酯(250μmol/L)6天、水楊酸(75μmol/L)3天、殼聚糖(40mg/L)6天、酵母提取物(0.25mg/L)12天、綠色木霉(90mg/L)3天、AgNO3(10μmol/L)3天。
  (3)6種誘導(dǎo)子對(duì)菊芋懸浮細(xì)胞中總酚誘導(dǎo)效果依次為酵

7、母提取物(1.0mg/L)>AgNO3(5μmol/L)>綠色木霉(90mg/L)>水楊酸(100μmol/L)>茉莉酸甲酯(300μmol/L)>殼聚糖(80mg/L),相應(yīng)的總酚含量增加到2.14、1.91、1.85、1.63、1.56、1.17倍。最佳濃度誘導(dǎo)時(shí)間為茉莉酸甲酯12天(2.61倍)、水楊酸6天(1.92倍)、酵母提取物3天(1.19倍),其余3種誘導(dǎo)子隨誘導(dǎo)時(shí)間增加細(xì)胞中總酚含量顯著降低。
  6種誘導(dǎo)子對(duì)菊芋

8、懸浮細(xì)胞中14種酚類物質(zhì)含量均具有顯著影響。茉莉酸甲酯誘導(dǎo)其中5種酚類物質(zhì)含量增加10倍以上,同比其他誘導(dǎo)子4-羥基香豆素含量最多增加了59.69倍。相比其他誘導(dǎo)子水楊酸誘導(dǎo)其中7種酚類物質(zhì)(阿魏酸、水楊酸、3-羥基肉桂酸、兒茶素、沒(méi)食子酸、東莨菪內(nèi)酯及原兒茶酸)含量增加最為顯著,分別增加了159.22、106.47、45.14、15.20、7.80、7.06、5.89倍。殼聚糖誘導(dǎo)其中6種酚類物質(zhì)含量增加10倍以上,咖啡酸和芥子酸含量

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