1、目的：構建豬戊型肝炎病毒ORF3基因的真核表達載體pcDNA3.1(+)/ORF3,并在COS-7細胞中進行表達。通過肌肉注射與IL-2聯(lián)合免疫Balb/C小鼠，檢測其產生的免疫應答水平，以期望通過基因疫苗作用使小鼠對戊肝病毒產生免疫防御能力。 方法：用PRIMER5.0軟件設計引物，PCR擴增ORF3全基因，將PCR產物純化后插入pcDNA3.1(+)載體，將重組質粒pcDNA3.1(+)/ORF3轉化入感受態(tài)細胞DH5α進行

2、大量復制。轉染COS-7細胞，用免疫細胞化學和Westenrn-Blot驗證其在真核細胞得到表達后，將重組質粒pcDNA3.1(+)/ORF3、對照空質粒pcDNA3.1(+)及生理鹽水分組通過肌肉注射免疫6周齡Balb/C雌鼠，隔兩周免疫一次，共免疫3次，第二周加白介素2輔佐免疫。初免后每隔2周采用ELISA間接法測定小鼠血清中抗ORF3 IgM抗體水平。通過PCR法檢測小鼠肌細胞中ORF3基因的存在。 結果：成功克隆了ORF

3、3基因，構建了pcDNA3.1(+)/ORF3重組真核表達載體，重組質粒能在COS-7細胞內有效表達目的蛋白。小鼠接種pcDNA3.1(+)/ORP3 核酸疫苗后能產生特異性IgM抗體。PCR檢測ORF3基因可在小鼠肌細胞中存在。 結論： （1）成功克隆了豬戊型肝炎病毒ORF3基因。 （2）成功構建了pcDNA3.1(+)/ORF3真核表達載體且其能在真核細胞中表達。 （3）pcDNA3.1(+)/ORF