1、微生物資源非常豐富，為了持續(xù)開發(fā)微生物產物，造福人類，人們必須尋找更多類型的微生物，但是，分子生態(tài)學的研究發(fā)現，現在人們所培養(yǎng)的微生物僅為自然界存在微生物中的少數，約有1.0％，或更少，究其原因是在自然界中存在的微生物大多不能在常規(guī)的分離平板上生長，他們是活的，但是尚未培養(yǎng)的微生物.長久以來都是利用傳統的微生物培養(yǎng)學方法對土壤微生物進行研究，利用熒光染料可直接對細胞進行熒光標記，并在熒光顯微鏡下直接計數。這類直接計數的方法被越來越多的運

2、用于土壤等環(huán)境樣品中的微生物數量檢測和計數，對估算環(huán)境中的微生物數量有重要意義。
　　 為了研究土壤微生物中未培養(yǎng)微生物的情況，本文以南京土壤以及江西紅壤為研究對象，采用羧基熒光素二醋酸酯（6-CFDA），4'，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）熒光計數，以及傳統的稀釋平板計數等方法研究了土壤的微生物數量、比較了短時間滅菌后土壤CFDA與平板計數結果的差異，并對CFDA在不同條件下的熒光染色效果進行研究。
　　 將GP

3、F標記大腸桿菌梯度稀釋，在熒光顯微鏡下進行熒光顯微計數，以顯微鏡視野菌數為橫坐標，平板計數結果為縱坐標，作熒光顯微鏡計數標準曲線。
　　 通過采用不同pH值的PBS緩沖液，測定CFDA標記DH5α的效果，結果表明，在pH值7.4-7.8間，染色效果較好，pH值7.6時染色效果最佳。CFDA對八株不同屬的菌株進行染色，發(fā)現CFDA對革蘭氏陽性菌的效果要好于革蘭氏陰性菌。對BS169的染色效果最好。
　　 對DH5α進行CF

4、DA染色計數，以及平板計數，結果表明，CFDA的計數結果為1ml DH5α樣品中，菌體的數量為47.38×107，而DH5α的平板計數結果為42.25×107個。
　　 通過熒光染料CFDA與DAPI染色計數和平板計數比較了經過三種處理方式的不同的土地的微生物數量.結果表明：土壤中能被DAPI染色的微生物為CFDA計數結果的1.5倍左右，這說明土壤中有大量的微生物處于存活狀態(tài)。但是同一種土壤樣品的CFDA染色計數結果比傳統的平板

5、計數結果高約2個數量級，說明有大量的未培養(yǎng)微生物的存在。
　　 通過對土壤短時間高壓蒸汽滅菌后，對其進行CFDA染色計數和平板計數。平板計數的結果顯示沒有活的微生物存在，但是通過CFDA染色計數發(fā)現，樣品中里面仍然有大量的存活狀態(tài)的微生物存在。平板計數法所采用培養(yǎng)基本身不能還原土壤微生物生存的真實環(huán)境，許多微生物能夠在土壤中存活生長，不能在LB培養(yǎng)基上生長，形成菌落。
　　 利用細菌濾器模擬土壤環(huán)境，從土壤中分離到一株放