1、,IL-27轉染人食管鱗癌細胞抗腫瘤效應及其機理研究,河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院 科研中心河北省腫瘤研究所劉麗華,,,我國是食管癌的高發(fā)區(qū)，世界上約50%的食管癌發(fā)生在中國，到醫(yī)院就診的患者中95%為中晚期。盡管通過手術、化療和放療使食管癌的生存率得到很大提高，平均5年生存率仍為10%。近年來，腫瘤生物治療受到了人們的關注，并逐漸成為腫瘤的第四種治療方法。,引 言,IL-12 family members：IL-12, IL-

2、23 and IL-27 is primarily produced from activated antigen presenting cells (monocytes, macrophages and dendritic cells) whereas IL-35 is produced by regulatory T cells. These cytokines are all composed of two subunits,

3、a helical subunit (IL-12p35、IL-23p19、IL-27p28、IL-35p35) and a soluble cytokine receptor-like subunit (IL-12p40、IL-23p40、IL-27EBI3、 IL-35EBI3).,,,,,,,引言,本研究旨在探討IL-27基因轉染對人食管癌細胞在裸鼠體內的抗腫瘤效應及其對免疫功能的影響，探討其抗腫瘤作用機制。,目 的,細胞轉染

4、,,Eca109/IL-27 Eca109/LXSNEca109細胞,1×107個細胞/只,,,皮下接種,腹腔接種,,,成瘤性、生存期,,腫瘤體積,建立動物模型,（mm3）＝長徑×短徑2×1/2,,IL-27對免疫調節(jié)作用研究,,Eca109/IL-27細胞的培養(yǎng)上清中檢測到IL-27，其含量為153.73±7.0pg/ml。而在Eca109/LXSN細胞和野生型Eca109細胞的培養(yǎng)上清中未

5、檢出IL-27。,蛋白水平鑒定轉染成功,,Fig.1 Expression of IL-27 EBI3 and p28 gene in different cells dected by RT-PCR. M: DNA marker; A:Eca109/IL-27 cells; B: Eca109/LXSN cells; C: Eca109 cells.,基因水平鑒定轉染成功,IL-27基因表達,Fig.2 Tumor’s growth

6、 in nude mice inoculated subcutaneously with different tumor cells. * vs Eca109 and Eca109/LXSN groups respectively, P<0.01,IL-27對腫瘤生長的影響,生存期56±4day54±3day97±4day *,Fig.3 Infiltration of NK cells in

7、 tumor tissues from nude mice after inoculation with different cells. * vs Eca109 and Eca109/LXSN groups respectively, P<0.05,IL-27對移植瘤組織NK細胞浸潤數量的影響,(,*,Fig.5 Cytotoxic activity of spleen cells from nude mice after in

8、oculation different tumor cells. * vs Eca109 and Eca109/LXSN groups respectively, P<0.05,IL-27對荷瘤裸鼠脾細胞免疫功能的影響,*,Fig.4 IFN-g production from spleen cells after inoculation different tumor cells. * vs Eca109 and Eca109/

9、LXSN groups respectively, P<0.01,Fig.6 Gene expression in tumor tissues after inoculation different tumor cells detected by RT-PCR. A: Eca109; B: Eca109/LXSN; C: Eca109/IL-27,IL-27對移植瘤組織中細胞因子表達的影響,本研究結果表明，接種IL-27轉染細胞

10、組裸鼠移植瘤生長緩慢、裸鼠生存期延長，移植瘤組織中仍有IL-27的表達，表明IL-27在裸鼠體內產生了抗腫瘤作用。IL-27受體高表達于NK細胞，因而我們進一步檢測了移植瘤組織中NK細胞浸潤的數量。結果表明，接種IL-27轉染細胞組移植瘤組織間質中NK細胞浸潤數量增高，效應分子IFN-g產生增多，殺傷活性增強。說明IL-27不僅可以募集NK細胞而且能夠增強其生物學效應。,討 論,,研究結果顯示接種Eca109/IL-27細胞

11、組移植瘤組織中T-bet和IL-12Rb2基因的表達水平增高。IL-27增強NK細胞產生IFN-g的分子基礎是IL-27與受體結合后活化STAT1，增加轉錄子T-bet表達，進而作用于靶基因促進IL-12Rb2和IFN-g等的轉錄。因此我們在分子水平上證明IL-27能夠促進NK細胞產生IFN-g 。,接種Eca109/IL-27細胞組移植瘤組織中Thl類細胞因子TNF-a、IL-1b和IL-6基因的表達亦升高。TNF-a在介導腫瘤細胞凋